《Virus Research》：RAB25 promotes hepatitis B virus-induced liver fibrosis progression through activation of the PI3K/AKT signaling pathway
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本研究针对乙型肝炎病毒（HBV）感染者经核苷类似物或干扰素治疗后肝纤维化进程仍持续存在的临床难题，首次揭示RAB25在HBV相关肝纤维化组织及肝星状细胞（HSCs）中异常高表达。通过体外实验证实，沉默RAB25可显著抑制TGF-β1和HBV相关肝癌细胞诱导的HSCs活化、增殖、迁移及纤维化标志物（α-SMA、Collagen I等）表达，其机制与抑制PI3K/AKT信号通路激活密切相关。该研究为HBV相关肝纤维化的靶向治疗提供了新策略。
在全球范围内，乙型肝炎病毒（HBV）感染影响着约2.57亿人，是肝硬化和肝癌的主要诱因。虽然核苷类似物或干扰素治疗能将病毒载量降至几乎检测不到的水平，但肝纤维化进程仍会持续，这成为临床治疗的重大挑战。肝纤维化是肝炎向肝硬化发展的关键阶段，其核心在于肝星状细胞（HSCs）的异常活化、过度增殖和迁移。因此，探寻调控HSCs活化的关键分子机制，对阻止甚至逆转肝纤维化进程具有重要意义。
近日发表于《Virus Research》的研究首次揭示Ras相关蛋白25（RAB25）在HBV诱导的肝纤维化中扮演着"加速器"角色。该研究通过生物信息学分析、临床样本验证和系列细胞实验，证实RAB25通过激活PI3K/AKT信号通路，显著促进HSCs的活化进程。这一发现为开发针对HBV相关肝纤维化的新型治疗策略提供了重要靶点。
研究人员首先通过生物信息学分析筛选肝纤维化相关基因，发现RAB25在GSE171294和GSE84044两个基因表达数据库的肝纤维化组织中显著上调。在临床队列中，肝纤维化患者血清RAB25水平也明显高于健康对照和无纤维化的慢性乙肝患者，且与APRI、FIB-4等无创纤维化指标呈正相关。
为深入探索机制，研究团队建立了HBV感染的肝纤维化细胞模型，采用肝星状细胞LX-2与HBV相关肝癌细胞HepG2.2.15共培养系统。通过基因沉默（siRNA）和过表达技术调控RAB25表达，结合细胞活力检测（CCK-8法）、克隆形成实验、划痕实验、蛋白质印迹（Western blot）等技术，系统评估RAB25对HSCs功能的影响。同时利用PI3K抑制剂LY294002进行通路阻断实验，验证信号通路的参与机制。
研究结果揭示多个重要发现：
在"肝纤维化相关基因的生物信息学筛选"部分，研究人员通过分析GEO数据库中的肝纤维化微阵列，鉴定出32个共同差异表达基因，其中5个与细胞迁移调控相关（AQP1、CXCL10、CCL20、SOX9、RAB25），而RAB25的上调最为显著。
在"RAB25在HBV相关肝癌细胞诱导的HSCs中表达上调"部分，实验显示HepG2.2.15细胞中TGF-β1水平显著高于普通HepG2细胞。与HepG2.2.15共培养的HSCs表现出更强的活力、增殖和迁移能力，同时纤维化标志物（α-SMA、Collagen I）、基质重塑因子MMP2和增殖相关蛋白PCNA的表达均显著升高。重要的是，RAB25在HBV激活的HSCs中表达明显上调。
"沉默RAB25抑制TGF-β1诱导的HSCs活化"部分显示，特异性siRNA沉默RAB25后，TGF-β1诱导的HSCs活化受到显著抑制，表现为细胞活力、增殖和迁移能力下降，纤维化相关蛋白表达降低。
相反，在"过表达RAB25促进TGF-β1诱导的HSCs活化"部分，RAB25过表达进一步增强了TGF-β1对HSCs的活化作用，证实了RAB25在HSCs活化中的促进作用。
在"沉默RAB25抑制HBV相关肝癌细胞诱导的HSCs活化"和"过表达RAB25促进HBV相关肝癌细胞诱导的HSCs活化"两部分中，研究人员在HBV感染的肝纤维化细胞模型中验证了RAB25的功能，发现RAB25沉默可抑制而过表达可促进HBV诱导的HSCs活化。
机制研究表明，在"RAB25促进HBV相关肝癌细胞诱导的HSCs中PI3K-AKT信号激活"部分，HepG2.2.15共培养显著促进HSCs中PI3K和AKT的磷酸化，而RAB25沉默抑制了这一过程，过表达则进一步增强。使用PI3K抑制剂LY294002可逆转RAB25过表达诱导的HSCs活化表型，证实PI3K/AKT通路在RAB25调控HSCs活化中的核心作用。
研究的讨论部分指出，这是首次报道RAB25在HBV相关肝纤维化中异常高表达，且与临床肝纤维化严重程度指标相关。RAB25通过调控PI3K/AKT信号通路影响HSCs的活化状态，这一发现为理解HBV相关肝纤维化的分子机制提供了新视角。
值得注意的是，研究还发现HSCs中RAB25表达的改变可间接影响共培养的肝癌细胞中HBV DNA水平，提示RAB25可能通过调控HSCs与肝细胞的相互作用影响HBV复制微环境。
该研究的局限性在于使用了HepG2.2.15细胞作为唯一的HBV表达模型，这种模型不能完全模拟自然受体介导的感染过程。未来研究需要整合支持受体介导的HBV感染的模型，以提供更深入的机制见解和更大的转化相关性。
综上所述，这项研究首次阐明RAB25通过激活PI3K/AKT信号通路促进HBV诱导的肝纤维化进程，为开发针对RAB25的靶向治疗策略奠定了理论基础，对改善HBV相关肝病患者的预后具有重要临床意义。靶向RAB25-PI3K/AKT轴可能成为阻止肝纤维化进展的新型治疗策略，为临床治疗提供新思路。
