一株烈性小肠结肠炎耶尔森菌噬菌体的生物学特性及在食品中的应用

　　摘要： 目的：以小肠结肠炎耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）为宿主菌分离噬菌体，测定噬菌体的生物学特性并评估其在食品中的抗菌潜力。方法：采用双层琼脂平板法分离并纯化噬菌体。通过透射电子显微镜观察噬菌体形态；提取基因组进行全基因组测序与生物信息学分析；采用点斑法与双层琼脂平板法测定噬菌体宿主范围；测定最佳感染复数（multiplicity of infection，MOI）、一步生长曲线和稳定性；通过监测胰酪蛋白胨培养液OD600 nm评估体外抑菌效果；应用结晶紫染色法定量分析噬菌体对小肠结肠炎耶尔森菌生物被膜抑制和清除能力；采用平板计数法，分别评估噬菌体在4 ℃（冷藏）与25 ℃（常温）条件下对牛奶、生菜及猪肉表面小肠结肠炎耶尔森菌的抑制效果。结果：成功分离一株新型烈性小肠结肠炎耶尔森菌噬菌体，命名为Yersinia phage vB_Yep_15。透射电子显微镜显示其具有短尾科典型形态，头部尺寸约54.80 nm×52.50 nm；全基因组分析将其归类于Teseptimavirus属Studiervirinae亚科，且未检出毒力、抗生素耐药性及tRNA相关基因。宿主范围测定表明，该噬菌体可裂解26 株测试菌株中的8 株（裂解率为30.8%），涵盖6 株猪源菌株及2 株藏野驴源菌株。其最佳MOI为0.01，潜伏期约20 min，爆发量达204 PFU/cell。在pH 4～11和4～37 ℃范围内保持稳定活性。体外抑菌实验显示，在MOI＝100条件下，120 min内显著抑制细菌生长，且480 min内未见细菌复苏（ΔOD600 nm＜0.02）。生物被膜清除能力测定显示，MOI 0.1、1、10、100处理组的清除率分别达到40.8%、25.6%、38.4%和53.4%，表明该噬菌体能有效清除宿主菌生物被膜。噬菌体vB_Yep_15在4 ℃和25 ℃条件下也都能有效抑制牛奶、生菜及猪肉表面的小肠结肠炎耶尔森菌，展现出良好的应用前景。结论：烈性噬菌体vB_Yep_15具备良好的生物学特性、生物被膜清除能力以及在常温和冷藏条件下对多种食品基质的有效抑菌潜力。本研究不仅详细解析了一株新型小肠结肠炎耶尔森菌噬菌体的生物学特性与基因组信息，也为开发靶向小肠结肠炎耶尔森菌的噬菌体制剂及其在食品生物安全防控中的应用提供了依据。