长双歧杆菌BBMN68中应答调节蛋白BBMN68_47的自调控及metK基因调控功能

　　摘要： 为阐明长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）BBMN68菌株酸耐受响应的调控机制，本研究聚焦应答调节蛋白BBMN68_47的功能解析。通过分子克隆技术构建BBMN68_47的3×FLAG标签过表达工程菌株，经聚合酶链式反应扩增、测序及蛋白质免疫印迹验证重组质粒（pDP152-BBMN68_47、pDP152-3×FLAG、pDP152-3×FLAG-BBMN68_47）表达有效性。在pH 4.5弱酸诱导条件下，采用染色质免疫共沉淀测序技术鉴定出118 个高置信度DNA结合峰（＞80%位于转录起始位点），结合生物信息学分析预测7 个候选DNA结合基序。进一步通过电泳迁移率变动分析证实BBMN68_47特异性结合两个保守基序：CTGGGCGTTT（探针0235）与CTGGACGAATCCTG（探针0075），分别调控其自身基因（自调控）及metK基因（编码S-腺苷甲硫氨酸合成酶）。结果表明BBMN68_47通过保守/新型DNA基序调控关键耐酸基因网络，在酸耐受响应中发挥核心转录调控作用。该发现为解析双歧杆菌酸适应分子机制及益生菌抗逆性工程改造提供理论依据。