《Frontiers in Immunology》：Impact of rice wine-steamed Cistanche deserticola polysaccharides on intestinal flora and immunological modulation in immunosuppressive mice induced by cyclophosphamide
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本研究系统揭示传统黄酒蒸制工艺通过降低肉苁蓉多糖分子量、改变单糖组成比例，显著增强其对环磷酰胺（CTX）诱导免疫抑制小鼠的免疫调节功效。WCP-16（蒸制16小时多糖）能最优逆转胸腺/脾脏指数异常，提升血清IL-2、IFN-γ、IgA、IgM水平及CD4+/CD8+比值，并通过调节肠道菌群（提升拟杆菌门/厚壁菌门值）和短链脂肪酸（SCFAs）代谢实现肠-免疫轴调控，为中药炮制机制提供科学依据。
黄酒蒸制对肉苁蓉多糖结构特性的影响
通过扫描电镜（SEM）观察到未加工多糖（RCP）呈分散块状碎片结构，而蒸制12小时（WCP-12）和16小时（WCP-16）的多糖表面出现明显碎片化和孔隙。微观红外成像显示随着蒸制时间延长，多糖粉末三维色彩图谱多样性增加。高效凝胶渗透色谱（HPGPC）分析表明，蒸制使多糖分子量从581万Da显著降低，且低分子量组分（443Da）比例上升。单糖组成分析显示，WCP-16的葡萄糖比例从48.89%降至41.09%，而具有免疫活性的半乳糖和甘露糖比例分别从6.76%升至10.63%、1.01%升至2.52%。
蒸制时间依赖的免疫调节活性增强
CCK-8实验证实WCP-16含药血清在5%-20%浓度范围内可显著提升TM4细胞和RAW264.7巨噬细胞活力。在CTX诱导的免疫抑制小鼠模型中，WCP-16组体重恢复趋势与阳性对照组（左旋咪唑）相当，胸腺指数和脾脏指数恢复最为显著。ELISA检测显示WCP-16能最高程度提升血清IL-2（157.3pg/mL）、IFN-γ（93.6pg/mL）、IgA（2.81mg/mL）和IgM（1.67mg/mL）水平。脾脏组织HE染色可见WCP-16组白髓结构完整，淋巴细胞排列密集，胸腺皮质髓质分界清晰。流式细胞术检测证实WCP-16使CD4+/CD8+比值从模型组0.86恢复至3.05，优于其他处理组。
肠道菌群-短链脂肪酸轴调控机制
16SrRNA测序显示WCP-16显著提升肠道菌群α多样性（Shannon指数从4.2升至6.8），β多样性PCoA分析表明其微生物群落结构最接近正常组。在门水平上，WCP-16将模型组升高的厚壁菌门/拟杆菌门（F/B）比值从8.7降至2.3，同时增加Muribaculaceae、Lachnospiraceae等有益菌科丰度。属水平上，Lachnospiraceae_NK4A136_group、Ligilactobacillus等产短链脂肪酸（SCFAs）菌群比例上升，而致病菌Klebsiella和Escherichia-Shigella被抑制。气相色谱检测证实WCP-16组粪便中乙酸、丙酸、丁酸等SCFAs含量最高，其中丁酸浓度较模型组提升3.2倍，与免疫参数呈显著正相关。
传统炮制工艺的科学价值
本研究首次系统阐明黄酒蒸制通过降解多糖链结构、增加活性单糖比例，增强肉苁蓉多糖对肠道菌群的发酵特性，进而通过SCFAs-G蛋白偶联受体（GPCRs）信号通路调节Treg细胞分化和组蛋白去乙酰化酶（HDAC）活性。WCP-16展现出的最优免疫调节效果，为中药"酒制增效"理论提供了微生物-代谢-免疫多维证据链，也为开发基于结构优化多糖的免疫调节剂奠定了应用基础。
