《Journal of Biological Chemistry》：Writers and Readers of Sialylation in Immunoregulation in Cancer
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本综述系统阐释了KLF5/RNF90/CPT1α轴在MASLD（原名NAFLD）中的新机制：转录因子KLF5上调E3泛素连接酶RNF90，后者通过K48连接的多聚泛素化降解脂肪酸氧化（FAO）限速酶CPT1α，抑制肝细胞脂质代谢，促进脂肪变性。研究为MASLD治疗提供了潜在靶点。
KLF5介导肝脂肪变性中RNF90表达上调
在代谢相关脂肪肝病（MASLD）小鼠模型和棕榈酸/油酸（POA）处理的肝细胞中，RNF90在mRNA和蛋白水平均显著上调。生物信息学分析发现RNF90启动子区存在三个潜在的KLF5结合位点。实验证实KLF5能直接结合RNF90启动子，正向调控其转录活性，且在脂肪肝中KLF5表达同样升高，与RNF90呈正相关。
RNF90在体外加剧肝脂肪变性
利用慢病毒构建RNF90敲低和过表达的肝细胞稳定系。在POA诱导的脂肪肝细胞模型中，敲低RNF90显著减轻脂质积累和甘油三酯（TG）水平；而过表达野生型RNF90（RNF90-WT）则加重脂肪变性，其E3连接酶活性缺失突变体（RNF90-DM）无此效应，表明RNF90促脂肪变性依赖其E3连接酶活性。
RNF90与CPT1α相互作用并促进其K48连接泛素化
通过免疫共沉淀联合质谱分析发现CPT1α是RNF90的潜在相互作用蛋白。免疫荧光和Co-IP实验证实两者存在共定位和直接结合。泛素化实验显示RNF90-WT可显著增强CPT1α的泛素化修饰，且主要为K48连接的多聚泛素化（蛋白酶体降解信号），而RNF90-DM作用微弱。点突变实验进一步确定CPT1α的第195位赖氨酸（K195）是其关键泛素化位点。
RNF90以E3连接酶活性依赖性方式调控CPT1α稳定性
过表达RNF90-WT能以剂量依赖的方式降低CPT1α蛋白水平并缩短其半衰期，而RNF90-DM或CPT1α-K195R突变体则不受影响。蛋白酶体抑制剂MG132可阻断RNF90介导的CPT1α降解，而溶酶体抑制剂无效，证实降解途径为泛素-蛋白酶体途径。在POA处理的肝细胞中，RNF90通过下调CPT1α抑制脂肪酸氧化（FAO）活性。
肝脏RNF90缺陷通过增强FAO减轻饮食诱导的小鼠肝脂肪变性
成功构建肝细胞特异性RNF90敲除（RNF90-HKO）小鼠。在高脂饮食（HFD）或高脂高果糖高胆固醇（HFHC）饮食诱导下，与对照（RNF90-Flox）小鼠相比，RNF90-HKO小鼠肝脏脂质沉积、TG和总胆固醇（TC）含量显著降低，CPT1α蛋白表达上调，FAO活性增强，伴随酮体生成相关酶HMGCS2 mRNA表达上调以及β-羟基丁酸（β-HB）和ATP水平升高。
肝脏RNF90过表达抑制FAO并加剧肝脂质积累
通过尾静脉注射AAV8病毒在小鼠肝脏特异性过表达RNF90-WT或RNF90-DM。结果显示，过表达RNF90-WT（而非RNF90-DM）可降低肝脏CPT1α蛋白水平，抑制FAO活性，减少β-HB和ATP生成，并加重HFD或HFHC饮食引起的肝脂肪变性。
CPT1α是RNF90调控FAO和脂肪变性的必要条件
拯救实验证实，在过表达RNF90的肝细胞中额外过表达CPT1α，可逆转RNF90对FAO的抑制及其促脂肪变性效应；反之，在RNF90敲低的肝细胞中再次敲低CPT1α，则消除了RNF90缺失带来的保护作用。这表明CPT1α是RNF90下游行使功能的关键效应分子。
综上所述，本研究揭示了一条新的KLF5/RNF90/CPT1α信号轴在MASLD发病机制中的作用：脂肪肝中上调的KLF5转录激活RNF90，RNF90作为E3连接酶促进CPT1α发生K48连接的泛素化降解，从而抑制脂肪酸氧化，导致肝细胞脂质代谢紊乱和脂肪变性。该发现深化了对MASLD分子机制的理解，并为治疗干预提供了新的潜在靶点。
