牛冠状病毒单克隆抗体的制备和鉴定

　　

摘要：

目的 牛冠状病毒（BCoV）是引发犊牛腹泻、成年牛冬季痢疾及各年龄段牛呼吸道疾病的主要病原体，其引发的疫病在畜牧业中广泛存在且危害严重，传统诊断和防控手段存在局限。制备牛冠状病毒单克隆抗体，为精准诊断冠状病毒研究提供关键材料。 方法 用纯化病毒免疫BALB/c小鼠，利用细胞融合技术制备杂交瘤细胞，筛选获得稳定分泌特异性抗体的单克隆细胞株。采用间接免疫荧光法（IFA）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）对单克隆抗体进行鉴定和亚类分析。同时构建cpCoV的S蛋白全长及S1、S2亚基真核表达质粒，转染293T细胞，通过IFA和Western-blot方法鉴定单克隆抗体识别的抗原表位区域。 结果 成功筛选制备了BCoV的单克隆抗体1E1，腹水效价>1∶81 000，亚型为IgG1，其抗体可与BCoV和羊冠状病毒（cpCoV）均发生特异性反应。通过真核表达病毒各结构蛋白及S蛋白各区域，验证1E1抗体识别的抗原表位均位于S蛋白的S1结构域。 结论 通过制备牛冠状病毒单克隆抗体，获得了能用于检测BCoV、cpCoV的单抗1E1，并鉴定其识别的抗原表位位于S1结构域，分析发现S1蛋白在BCoV和cpCoV同源性为95.4%-99.6%，但有明显差异的位点，本文为检测牛羊冠状病毒提供了新方法，为病毒的基础研究提供新工具。