梨火疫病生防菌的筛选、鉴定及防效测定

　　

摘要：

目的 梨火疫病是由解淀粉欧文氏菌（Erwinia amylovora）侵染引起的细菌性病害，对梨和苹果产业构成重大威胁。从山梨（Crataegus cuneata）以及新疆野苹果（Malus sieversii）的枝条内筛选出对E. amylovora具有较强拮抗作用的菌株，为E. amylovora的生物防治提供菌种资源。 方法 采用平板对峙法筛选对E. amylovora具有拮抗效果的菌株，结合生理生化反应、16S rDNA和rpoB基因测序对拮抗菌进行鉴定，确定其分类地位；通过甲醇抽提法获得拮抗菌KX1对E. amylovora具有抑制作用的体外抑菌物质；利用薄层层析（TLC）对活性成分进行分离；采用液相色谱-质谱联用（LC-MS）技术对上清液中脂肽类物质进行鉴定；对菌株KX1的全基因组数据进行生物信息学分析，探究其次级代谢产物基因簇；对库尔勒香梨（Pyrus sinkiangensis Yü）离体叶片、枝条和幼果进行温室防效测定。 结果 分离得到7株对E. amylovora具有较强拮抗作用的菌株，其中KX1的拮抗效果最强，结合生理生化特性、16S rDNA以及rpoB基因序列分析，菌株KX1被鉴定为贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）。菌株KX1的甲醇提取物中含有脂肽类物质，TLC及LC-MS分析表明脂肽类物质主要是表面活性素（surfactin）。脂肽粗提物在不同温度、pH以及储存时间处理后均能保持抑菌活性。菌株KX1的基因组大小为4.1 Mb，GC含量为46.33％。antiSMASH预测到1个次级代谢产物基因簇与丰原素相关的基因簇同源性为80%。温室防效测定结果表明，接种菌株KX1后，库尔勒香梨的幼果、叶片及枝条在保护性试验中的病情指数均显著降低，其防效分别为100%、55.33%和70.65%，且保护性防效优于治疗性防效。 结论 贝莱斯芽胞杆菌KX1能有效抑制E. amylovora的活性，具有一定的生防潜力。