《Frontiers in Neurology》：A novel non-sense variant in GSDME causing exon skipping associated with DFNA5 in a large Chinese family
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本研究首次报道了GSDME基因新型无义变异（c.1123G>T）通过破坏外显子剪接增强子（ESE）引发外显子8跳跃，进而导致常染色体显性遗传性耳聋（ADNSHL）的分子机制。通过迷你基因剪接实验证实该变异引起mRNA剪接异常，为DFNA5耳聋的获得性功能（GOF）假说提供了关键证据，提示无义变异亦可通过非经典剪接机制致病。
引言
听力损失是全球重大健康负担，其中遗传因素占40-60%，涉及150多个致病基因。常染色体显性非综合征性听力损失（ADNSHL）因表现度可变和外显不全等特点，给基因变异解读带来挑战。DFNA5型耳聋由GSDME基因突变引起，其独特之处在于几乎所有致病突变均导致mRNA水平外显子8的完全跳跃，形成截短蛋白。GSDME基因敲除小鼠听力正常这一现象，为获得性功能（GOF）致病假说提供了有力支持。
材料与方法
研究对象为包含72名成员的汉族常染色体显性遗传耳聋大家系，通过纯音测听、颞骨CT等完成临床表征。采用全基因组测序（WGS）和Sanger测序进行基因分析，筛选标准包括人群频率＜1%、符合显性遗传模式且位于189个耳聋相关基因面板内。通过迷你基因剪接实验（pSPL3载体/COS-7细胞系）验证变异对剪接的影响，并应用SpliceAI、ESEfinder等工具进行生物信息学预测。
结果
临床特征显示该家系耳聋表现为语后、双侧对称、进行性感官神经性听力损失，高频区首发并随年龄累及全频段。基因分析发现GSDME基因第8外显子存在新型杂合无义变异c.1123G>T（p.Glu375Ter），该变异与表型完全共分离。迷你基因实验证实突变体产生263bp异常条带，测序显示外显子8完全跳跃，导致阅读框移位及第372位提前终止密码子。ESEfinder预测该变异破坏SF2/ASF剪接因子结合基序，削弱外显子剪接增强子活性。文献综述发现20个已报道GSDME致病变异均集中在外显子8周边区域，表型存在显著异质性。
讨论
本研究首次揭示GSDME无义变异通过非经典剪接机制致病，挑战了"无义变异导致单倍体不足即良性"的传统认知。变异引发的非义介导剪接异常（NAS）可能是细胞规避无义介导衰变（NMD）的逃逸机制。群体数据库分析显示，位于外显子8关键区域前的丧失性功能（LOF）变异多为良性，而诱导外显子8跳跃的变异均具致病性，强力支持GOF假说。表型变异性提示外显子8跳跃虽是必要条件，但修饰基因与环境因素共同调控临床进程。
结论
GSDME c.1123G>T无义变异通过NAS机制引起外显子8跳跃，扩展了DFNA5的突变谱系和致病机制认知。该研究强调了对GSDME变异进行功能验证的必要性，为遗传咨询提供了新范式。
