基于宫颈阴道自采样与尿液DNA甲基化分析实现子宫内膜癌复发监测的非侵入性新策略

《International Journal of Cancer》：Detection of recurrent endometrial cancer via DNA methylation analysis of cervicovaginal self-samples and urine

本研究首次证实通过家庭自采集宫颈阴道样本和尿液进行DNA甲基化（DNA methylation）分析可有效监测子宫内膜癌复发。研究发现治疗后无复发患者甲基化水平显著降低（宫颈样本阳性率从90.7%降至19.5%，尿液从80.5%降至20.9%），而复发患者特定标记物（如CDH13/CDO1/GHSR等）甲基化水平重新升高。局部复发检测率高达100%（宫颈样本）和90%（尿液），为优化随访模式、减轻医疗负担提供了分子依据。

Abstract

DNA甲基化分析在自采集样本中显示出原发性子宫内膜癌检测潜力。本研究探索其作为治疗后监测的非侵入性替代方案。43名未复发患者在家庭采集治疗前后宫颈阴道自采样和尿液，17名复发患者在复发时提供样本。使用定量甲基化特异性PCR（qMSP）检测9个标记物（ADCYAP1、BHLHE22、CDH13、CDO1、GALR1、GHSR、HAND2、SST和ZIC1）。无复发患者治疗后多数标记物水平下降，宫颈样本甲基化阳性率从90.7%降至19.5%（p<0.0001），尿液从80.5%降至20.9%。复发患者宫颈样本中CDH13、CDO1、GALR1、GHSR和HAND2及尿液中CDO1、GHSR和HAND2甲基化水平高于无复发者。任何复发患者的甲基化阳性率为宫颈样本62.5%、尿液58.8%，局部复发患者达宫颈样本100%、尿液90.0%。表明甲基化检测是有前景的子宫内膜癌术后监测方法。

1 INTRODUCTION

子宫内膜癌是发达国家最常见妇科恶性肿瘤，发病率持续上升。虽多数患者预后良好，但10%–20%会复发，复发患者预后显著差于原发性疾病。现行指南建议密集随访（前2年每3–4个月一次），给患者和医疗系统带来沉重负担。DNA超甲基化是癌变早期表观遗传改变，Wever等研究证实宫颈阴道自采样和尿液DNA甲基化分析可实现家庭环境下子宫内膜癌无创检测。但自采样与甲基化检测用于术后监测尚未探索。本研究旨在通过甲基化水平变化监测子宫内膜癌复发，假设治疗后甲基化正常化，复发时恢复异常状态。

2 MATERIALS AND METHODS

本研究延续SOLUTION1研究设计，纳入60例子宫内膜癌患者（43例无复发，17例复发）和健康对照。患者家庭自采样使用Evalyn刷（宫颈样本）和EDTA防腐尿液管。DNA通过NucleoMag96 Tissuekit（宫颈样本）和Quick DNA尿液kit提取，重亚硫酸盐转化后使用qMSP检测9个标记物。以ACTB为内参基因，ΔCt值计算甲基化水平（2^{–(Ct marker?Ct ACTB)}×100），采用Wever等建立的逻辑回归模型判定阳性（宫颈样本阈值≥0.46，尿液≥0.40）。统计学分析使用Wilcoxon检验、卡方检验等，p<0.05为显著。

3 RESULTS

3.1 Study population and characteristics

无复发患者治疗后中位随访4.1年采集样本，复发患者中位复发时间1.9年。复发类型包括局部（58.8%）、区域（23.5%）和远处复发（17.6%）。共检测207份宫颈样本和203份尿液。

3.2 Pre- and post-treatment DNA methylation levels

无复发患者治疗后宫颈样本中除SST外所有标记物甲基化水平显著下降（p<0.05），尿液除HAND2（p=0.054）外均下降。治疗后水平接近或低于健康对照。手术与否或辅助治疗不影响甲基化水平。个体内甲基化变化在样本类型间呈中度至强相关（ρ=0.40–0.67）。

3.3 DNA methylation levels in recurrent patients

复发患者宫颈样本中CDH13、CDO1、GALR1、GHSR和HAND2甲基化水平高于无复发者（p<0.05），尿液CDO1、GHSR和HAND2升高。局部复发患者甲基化水平最高，区域和远处复发依次降低。

3.4 DNA methylation positivity

无复发患者宫颈样本甲基化阳性率从90.2%降至19.5%（p<0.0001），尿液从80.5%降至22.0%。复发患者总体阳性率宫颈样本62.5%、尿液58.8%，局部复发分别达100%和90.0%。样本间阳性一致性中等（κ=0.489）。

4 DISCUSSION

本研究首次验证家庭自采样甲基化分析用于子宫内膜癌复发监测的可行性。局部复发高检出率尤为重要，因局部复发更可能通过根治性治疗获救。与ctDNA相比，自采样更无创且适合家庭监测。患者可能更接受尿液采样，但宫颈样本对局部复发灵敏度略优。研究局限性包括复发样本量小、模型针对原发癌优化、随访间隔长等。未来需纵向研究验证早期无症状复发检测效能。

结论

DNA甲基化分析自采集样本可有效区分子宫内膜癌复发与缓解状态，尤其对局部复发敏感，有望减轻随访负担并优化医疗资源配置。