《Fish & Shellfish Immunology》：In-Vivo Evaluation of Silver Nanoparticles-Enhanced
Chlorella Protein Nanovaccine for Immunological Defense in Grouper (
Epinephelus sp) Against RNA Viral Infections
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病毒性神经坏死病（VNN）导致罗非鱼养殖高死亡率，本研究通过AgNPs-小球藻蛋白纳米疫苗注射验证其增强免疫和促进生长效果，T3组生存率达90%，红细胞等指标显著改善，组织损伤减少至25%，为环保长效的疾病防控提供新方案。
Defa Rizqi Machfuda | Uun Yanuhar | Asus Maizar Suryanto Hertika | Ranjith Kumar Rajamani | Heru Suryanto | Nezya Pramudya Wardani | Andik Isdianto | Aisha Surya Ananda
印度尼西亚东爪哇省马朗市Veteran路，布拉维贾亚大学渔业与海洋科学学院水产养殖硕士项目
摘要
病毒性RNA疾病，尤其是病毒性神经坏死（VNN），在养殖石斑鱼（Epinephelus sp.）中通常会导致极高的死亡率（约80–100%），对亚洲地区的经济造成重大影响。传统的疫苗接种方法效果不佳，主要是由于抗原不稳定以及产生的免疫力较弱且持续时间较短。纳米疫苗平台——这里使用的是添加了银纳米颗粒（AgNPs）的Chlorella衍生蛋白——为水生生物提供了更好的抗原递送和免疫调节途径。本研究评估了AgNPs与Chlorella vulgaris蛋白纳米疫苗在防治VNN感染石斑鱼方面的效果，旨在改善其生长状况、血液指标、存活率和组织完整性。实验设置了8组样本：2组对照组（K?、K+）和6种不同剂量的实验组（T1–T6）。实验鱼通过注射方式接受纳米疫苗后，再暴露于病毒环境中。关键检测指标包括血液学指标（红细胞、白细胞、血红蛋白、血细胞比容、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、肠道和肾脏的组织病理学变化，以及CD4、CD8、IgM细胞的比例分析、生长情况（体长和体重）、存活率（SR）和相对存活率（RPS）。结果表明，纳米疫苗显著提升了鱼类的生长和免疫能力。其中T3剂量组的实验效果最佳：体长达到12.73 ± 0.87厘米，体重为18.00 ± 1.50克，存活率为90%，相对存活率为82%。血液学指标有所改善（红细胞数量为2.52×106个/μL，白细胞数量为1.76×103个/μL，血红蛋白含量为7.4克/分升，MCV为102 μm3，MCHC为26.4%）。免疫检测显示CD4+细胞占比13.44%，CD8+细胞占比8.48%，IgM抗体占比4.25%。与感染严重病毒的鱼类相比，接种纳米疫苗的鱼类组织损伤较轻（≤25%）。这表明纳米疫苗是一种环保且长效的海洋水产养殖疾病防护手段，符合联合国可持续发展目标14（保护水下生物）的要求。
章节摘录
引言
海洋水产养殖面临病毒感染的挑战，因为病毒传播迅速且毒力强。病毒性神经坏死（VNN）是一种RNA病毒，对石斑鱼（Epinephelus sp.）养殖造成毁灭性影响，可导致80%至100%的死亡率。因此，该病毒每年在东南亚地区造成的经济损失超过2.5亿美元[1]。因此，亟需有效的防控措施。
材料
实验所用石斑鱼（Epinephelus sp.）幼鱼初始质量为8.0 ± 0.5克，体长7.5 ± 0.4厘米，来自印度尼西亚龙目岛的一家认证孵化场。柠檬酸钠及其他辅助试剂购自德国默克公司（Merck）。
研究设计
本研究通过体内实验测试了添加银纳米颗粒（AgNPs）的Chlorella vulgaris蛋白纳米疫苗对石斑鱼（Epinephelus sp.的抗病毒效果。实验持续56天，分别在实验第0天（免疫前）和第56天进行采样。
石斑鱼血细胞分析结果
在阴性对照组（K-）中，红细胞数量为2.52×106个/μL（图1A）。而阳性对照组（K+）在感染VNN后，红细胞数量降至1.98×106个/μL，表明病毒感染通过免疫压力或细胞损伤影响了红细胞的生成[18]。仅接受AgNPs处理的T1组中，红细胞数量略有增加。
结论
基于AgNPs和Chlorella vulgaris的纳米疫苗成功应用于感染VNN的石斑鱼实验中。结果显示，该疫苗促进了鱼类生长并增强了其免疫系统。其中，T3剂量组的体长最长（12.73 ± 0.87厘米），体重增加最多。
声明
作者声明在本文撰写过程中未使用任何人工智能工具或服务。
作者贡献说明
Defa Rizqi Machfuda：撰写、审稿与编辑、原始稿撰写、数据验证、方法学设计、实验实施与数据管理。
Uun Yanuhar：撰写、审稿与编辑、数据验证、方法学设计、实验实施与概念构建。
Ranjith Kumar Rajamani：撰写、审稿与编辑、数据可视化、方法学设计、实验实施。
Asus Maizar Suryanto Hertika：撰写、审稿与编辑、数据可视化、方法学设计、实验实施。
Heru Suryanto：撰写……
伦理声明
本研究已获得布拉维贾亚大学动物伦理委员会的批准（批准编号：112-KEP-UB-2025）。所有实验操作均符合相关法规和机构政策。
利益冲突声明
作者声明在撰写本文时不存在任何财务利益或其他利益冲突。
致谢
作者衷心感谢布拉维贾亚大学研究与社区服务部（DRPM）通过“教授研究生态系统强化计划”为本研究提供的慷慨资金支持。本研究依据合同编号01047.21/UN10.A0501/B/KS/2025获得资助。我们感谢他们的宝贵支持，使这项研究得以顺利进行。
