牦牛乳酪蛋白抗氧化肽的筛选及对肝细胞氧化应激损伤的保护作用

　　摘要： 本研究通过中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶及胃蛋白酶的单酶/复酶组合策略酶解牦牛乳酪蛋白，获得15 种酶解多肽溶液。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率、2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)阳离子自由基清除率及H2O2诱导的AML12肝细胞氧化应激损伤模型存活率为初筛指标，发现中性蛋白酶解、胰蛋白酶-木瓜蛋白酶双酶解及胰蛋白酶-中性蛋白酶-胃蛋白酶三酶解产物（20 倍稀释）具有显著抗氧化活性，不仅能够高效清除自由基，还能够将损伤细胞存活率分别提升至69.38%、65.95%、63.32%（P＜0.01）。进一步利用DEAE-52纤维素柱层析与Sephadex G-50凝胶层析进行分级纯化，筛选出5 种抗氧化多肽组分（Z1-C、Z3-B、YM3-B、YZW1-B、YZW3-B），其能使细胞存活率进一步显著提升至72.20%～82.19%（P＜0.000 1）。通过荧光显微成像及酶联免疫吸附测定证实，上述多肽组分可显著降低细胞内氧化损伤标志物（活性氧、丙二醛、一氧化氮）及炎症因子（肿瘤坏死因子α、白细胞介素-1β）水平。结果表明，牦牛乳酪蛋白酶解多肽通过协同抗氧化与抗炎作用，能够有效抵御肝细胞氧化应激损伤。本研究可为开发靶向肝病干预的功能性食品提供理论依据。