《Medical Care》：Causal effect of chloride intracellular channel protein 5 on chronic periodontitis: A Mendelian randomization study
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本综述采用孟德尔随机化（MR）方法，系统评估了氯离子胞内通道蛋白5（CLIC5）对慢性牙周炎（CP）风险的潜在因果影响。研究利用公开的全基因组关联研究（GWAS）汇总数据，通过多种MR方法（如逆方差加权、加权中位数等）分析，发现CLIC5水平升高与CP风险降低存在显著负相关，提示CLIC5对CP可能具有保护作用。敏感性分析支持了结果的稳健性，为探索CLIC5作为CP潜在治疗靶点提供了遗传学证据。
引言
慢性牙周炎是一种由细菌引起的、发生在牙齿支持组织（包括牙龈、牙周膜、牙骨质和牙槽骨）的慢性炎症性疾病。其发生发展与免疫系统的过度激活密切相关，因此，杀菌和调节免疫状态是治疗慢性牙周炎的首要考量。孟德尔随机化是一种利用遗传变异作为工具变量来推断暴露因素与结局之间因果关系的流行病学方法，近年来在包括骨关节炎、心血管疾病、精神分裂症、炎症性疾病、癌症、卒中、糖尿病、脓毒症、感染以及牙周病在内的多个医学领域获得了广泛应用。多项近期研究进一步为遗传因素在慢性牙周炎发病机制中的作用提供了证据，凸显了识别和表征影响牙周健康与疾病的遗传变异的重要性。
氯离子胞内通道蛋白5因其在调节细胞离子稳态和炎症中的已知功能而成为一个引人关注的候选基因。近期研究已将氯离子通道与炎症性疾病的发病机制联系起来。值得注意的是，研究表明CLIC5在炎症过程中的免疫细胞调控中起着关键作用。对CLIC1的平行研究揭示了其离子通道活性，并提示其可能发挥抗炎作用。氯离子通道功能异常已在多种炎症性疾病中被观察到，这些发现表明包括CLIC5在内的氯离子通道可能成为治疗炎症性疾病的新靶点。然而，尽管越来越多的证据将氯离子通道与炎症联系起来，CLIC5在慢性牙周炎中的具体作用在很大程度上仍未得到探索。为填补这一知识空白，本研究旨在通过全面的孟德尔随机化分析，探讨CLIC5与慢性牙周炎之间的潜在因果关系。
方法
为研究CLIC5与慢性牙周炎之间的潜在因果关系，本研究利用公开可用的全基因组关联研究汇总数据进行了两样本孟德尔随机化分析。分析在MR-Base平台上进行。鉴于本研究使用的是公开数据库，因此不需要伦理批准。
数据来源：本研究的暴露因素是CLIC5，以与其表达或活性相关的遗传变异为代表，相关全基因组关联研究汇总统计数据来自一个公开数据库。该暴露数据集包含了与CLIC5水平相关的每个单核苷酸多态性的效应大小估计值、标准误及其相应的P值。结局为慢性牙周炎，其全基因组关联研究汇总统计数据来自一项独立研究。
单核苷酸多态性选择与聚类：为确保遗传变异的独立性，基于连锁不平衡进行了单核苷酸多态性聚类。聚类距离设置为10，000千碱基，连锁不平衡r2阈值为0.001，全基因组显著性阈值为P < 5 × 10?6。此过程去除了处于高连锁不平衡的单核苷酸多态性，得到一组相对独立的遗传工具变量用于分析。
孟德尔随机化分析方法：研究采用了四种孟德尔随机化方法来估计CLIC5对慢性牙周炎的因果效应。首先，逆方差加权法是其中最常用的方法之一，它通过单核苷酸多态性特定效应估计值的方差的倒数进行加权。其次，MR-Egger回归法通过估计一个截距项来允许水平多效性的存在。第三，加权中位数法通过计算加权的单核苷酸多态性特定效应估计值的中位数，提供了对因果效应的稳健估计。最后，加权众数法估计了加权的单核苷酸多态性特定效应估计值的众数，提供了另一种对异常值稳健的方法。
统计分析：对于每种孟德尔随机化方法，我们计算了CLIC5对慢性牙周炎的因果效应的效应大小、标准误和P值。P值小于0.05被认为具有统计学显著性。
敏感性分析：为评估研究结果的稳健性，我们进行了以下敏感性分析：进行了留一法分析，每次迭代排除一个单核苷酸多态性，并使用剩余的单核苷酸多态性重新计算因果效应。使用Cochran Q统计量评估了遗传关联的异质性。显著的Q统计量将表明分析中包含的遗传变异之间存在异质性。
数据协调：为确保研究间的可比性，我们通过比对每个单核苷酸多态性的效应等位基因、非效应等位基因和样本量，协调了暴露和结局数据。
结果
孟德尔随机化分析的主要结果：我们使用MR-Base平台进行孟德尔随机化分析，以研究CLIC5对慢性牙周炎风险的因果效应。暴露定义为CLIC5，结局为慢性牙周炎。
逆方差加权法结果：孟德尔随机化分析的主要结果总结于表1和图1。使用逆方差加权法，我们观察到CLIC5与慢性牙周炎之间存在统计学上显著的负相关，效应大小为-0.1349。这一发现表明，与CLIC5水平升高相关的遗传变异可能与慢性牙周炎风险降低相关。
MR Egger回归结果：然而，MR-Egger回归未显示出统计学上显著的关联，尽管效应方向与逆方差加权法一致。
加权中位数和加权众数法结果：此外，我们采用了加权中位数法和加权众数法来考虑潜在的异常值并提供稳健估计。两种方法均显示CLIC5与慢性牙周炎呈负相关，其中加权中位数法达到了统计学显著性，而加权众数法则接近显著性。
使用Egger回归评估水平多效性：截距项未显著偏离零，表明没有方向性水平多效性的证据。这意味着工具变量可能满足孟德尔随机化关于除对暴露的影响外无多效性途径的假设。因果估计得到了无因不平衡多效性导致的系统偏差的支持。我们孟德尔随机化结果的稳健性通过Egger截距检验得到进一步验证，该检验显示无显著的多效性偏倚，这为在主要分析中使用标准的逆方差加权法提供了依据。
遗传关联的异质性评估：为评估遗传关联的异质性，我们计算了每种方法的Cochran Q统计量。MR Egger法和逆方差加权法均表明分析中包含的遗传变异之间无显著异质性。
留一法分析：我们还进行了留一法分析以检查单核苷酸多态性对总体结果的影响。留一法分析证实了我们研究结果的稳健性，效应估计值在不同迭代中基本保持一致。
数据协调与结果一致性：此外，我们协调了暴露和结局数据以确保研究间的可比性。协调后的数据集显示大多数单核苷酸多态性的效应方向一致，增强了我们研究结果的有效性。总之，我们的孟德尔随机化分析为CLIC5水平升高与慢性牙周炎风险降低之间的潜在因果关联提供了证据。
讨论
氯离子胞内通道蛋白5作为一种氯离子通道蛋白，在维持细胞稳态和调节多种细胞过程中起着至关重要的作用。一项关于肝细胞癌的研究也发现，CLIC的表达与免疫状态显著相关，并且CLIC的遗传改变也与肝细胞癌患者较低的总生存期显著相关。这些发现表明CLIC通过影响免疫水平来调节肿瘤生长。此外，CLIC5的表达已被证明与M2巨噬细胞的浸润呈强正相关，与CD8(+) T细胞的浸润呈负相关，这表明CLIC5参与免疫调节，并可能在肿瘤微环境中扮演关键角色。这些研究共同提示CLIC家族参与免疫细胞的调节。尽管目前没有直接证据支持这一假设，我们推测CLICs可能参与调节与牙周组织相关的炎症过程。
先前的一项研究报告了遗传变异与晚期牙周炎之间的关联，这自然引出了应用孟德尔随机化分析来研究CLIC5与慢性牙周炎之间潜在联系的想法。我们的孟德尔随机化分析有几个优势。首先，通过利用公开可用的全基因组关联研究汇总统计数据，我们使用大样本量研究了CLIC5与慢性牙周炎之间的潜在因果关系，从而增加了我们分析的统计效力。其次，使用多种孟德尔随机化方法和敏感性分析使我们能够评估研究结果的稳健性，并尽量减少多效性和其他偏倚来源的潜在影响。
然而，我们的研究也存在一些值得考虑的不足之处。首先，与任何孟德尔随机化分析一样，我们的研究结果依赖于所使用的遗传工具变量的有效性。尽管我们进行了聚类以确保遗传变异的独立性，但所包含的一些单核苷酸多态性仍可能受到多效性或与其他变异的连锁不平衡影响。其次，CLIC5与慢性牙周炎之间关联的具体生物学机制尚不清楚。需要进一步的实验研究来阐明CLIC5在牙周健康和疾病中的作用。
结论
总之，我们的研究采用了一种稳健的孟德尔随机化方法来评估CLIC5与慢性牙周炎风险之间的潜在因果关系。我们的发现为日益增多的证据体系做出了贡献，这些证据凸显了氯离子通道蛋白在调节与牙周病相关的炎症过程中的重要性。
未来的研究应力求在独立队列中重复我们的观察结果，并更深入地探究CLIC5影响牙周结局的分子途径。总体而言，本研究强调了进一步探索CLIC5与牙周健康关系及其对临床实践潜在意义的重要性。
