《Journal of Agriculture and Food Research》：Immunoprotective potential of steamed
Panax notoginseng saponins: chemical characterization and mechanistic insights via the TLRs/NF-κB pathway
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本研究针对男性不育中生精功能障碍的临床难题，探讨了藤茶活性成分二氢杨梅素（DHM）对环磷酰胺（CTX）诱导的血睾屏障（BTB）损伤的保护作用。研究发现DHM能显著改善精子参数、恢复BTB紧密连接蛋白表达，并证实其作用与调控TGF-β3/p38 MAPK信号通路密切相关。该研究为天然产物干预男性不育提供了新的理论依据。
随着全球生育率的持续下降，男性不育已成为严峻的公共卫生问题。统计显示，中国不孕症发病率已达12.5%-15%，其中生精功能障碍是主要病因之一。血睾屏障（Blood-Testis Barrier, BTB）作为生精小管中的特殊结构，由Sertoli细胞间的紧密连接（Tight Junctions, TJs）构成，对维持精子发生微环境至关重要。然而，化疗药物环磷酰胺（Cyclophosphamide, CTX）等环境毒素可通过诱导氧化应激破坏BTB完整性，但其具体分子机制尚不明确。
在这项发表于《Journal of Agriculture and Food Research》的研究中，宁夏医科大学药理教研室团队首次发现藤茶活性成分二氢杨梅素（Dihydromyricetin, DHM）能通过调控TGF-β3/p38 MAPK信号通路改善CTX诱导的生精功能障碍。研究人员通过体内外实验相结合的策略：在动物层面采用CTX诱导的小鼠生精功能障碍模型，设空白对照组、CTX模型组、左卡尼汀（Levocarnitine, LC）阳性药对照组以及低中高剂量DHM治疗组；在细胞层面使用CTX代谢物丙烯醛（Acrolein, ACR）损伤TM4 Sertoli细胞模型。通过精子分析、组织病理学评估、生物素示踪技术、蛋白质印迹（Western Blot）和免疫荧光等技术系统评估DHM的干预效果。
3.1. DHM改善CTX所致睾丸组织病理损伤和精子参数
研究显示，75 mg/kg和150 mg/kg剂量DHM能显著逆转CTX引起的睾丸和附睾系数降低（P<0.001），并将精子数量从模型组的0.0187×108提升至0.0322×108，精子活力和存活率分别从9.322%和14.457%恢复至37.988%和55.11%。HE染色证实DHM治疗组生精小管结构完整，生精细胞层次清晰，管腔内可见大量成熟精子。
3.2. DHM恢复CTX损伤的BTB完整性
通过生物素示踪实验发现，DHM治疗显著减少荧光染料向生精小管腔内的渗透距离（P<0.001）。Western Blot和免疫荧光结果显示，DHM能剂量依赖性上调Occludin、Claudin-11、N-cadherin和连接蛋白43（Connexin 43, Cx43）等BTB关键蛋白的表达，证实其具有修复血睾屏障超微结构的作用。
3.3. DHM调控TGF-β3/p38 MAPK信号通路
机制研究表明，DHM（150 mg/kg）可显著抑制CTX引起的TGF-β3蛋白上调和p38 MAPK磷酸化（p-p38 MAPK）。尽管p-p38/p38比值未达统计学差异，但p-p38 MAPK的绝对表达量明显下降，提示DHM可能通过干预该通路活化维持BTB稳态。
3.4. DHM缓解ACR诱导的TM4 Sertoli细胞损伤
体外实验证实，40 μM DHM可使ACR损伤的TM4细胞存活率从50%恢复至80%以上（P<0.001）。F-actin荧光染色显示DHM能有效修复ACR引起的细胞骨架断裂，维持肌动蛋白微丝网络完整性。
3.5. DHM与TGF-β3抑制剂S-7701的协同效应
联合使用DHM和TGF-β3抑制剂S-7701能进一步降低ACR诱导的TGF-β3和p-p38 MAPK表达，并显著提升Claudin-11蛋白水平（P<0.01），证实TGF-β3/p38 MAPK通路在DHM保护作用中的核心地位。
本研究首次系统阐明了DHM通过抑制TGF-β3/p38 MAPK通路活化，维护BTB结构和功能完整性，从而改善化学性生精功能障碍的机制。值得注意的是，DHM对F-actin细胞骨架的保护作用为其多靶点调控特性提供了新证据。尽管研究未涉及生殖激素水平和交配实验等终极生育力指标，但为天然产物干预男性不育提供了理论依据。鉴于DHM源于传统饮品藤茶，具有良好安全性，其开发为功能性食品或辅助治疗药物潜力巨大。后续研究可结合药代动力学分析和时间维度信号通路监测，进一步优化DHM的临床应用策略。
