《Journal of Medical Virology》：Epstein-Barr Virus Infection at Single-Cell Resolution
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本综述系统梳理了单细胞与空间组学技术如何革新EB病毒（EBV）感染研究。文章详述了从早期电子显微镜观察到当前高通量测序的技术演进，重点解析了EBV在B细胞、上皮细胞等不同宿主细胞中的潜伏（如EBNA、LMP）和裂解程序（如BZLF1）异质性，及其在相关癌症（如BL、NPC、cHL）和自身免疫病（如MS、SLE）中的致病机制。综述强调单细胞技术揭示了病毒-宿主互作的空间动态和免疫微环境特征（如T细胞耗竭标志LAG3+、PD-1/PD-L1轴），为靶向治疗提供了新视角。
单细胞与空间测序（约2020年至今）：EBV感染的新维度
单细胞与空间组学技术通过高通量捕获细胞分子特征，实现了EBV感染研究从群体水平到单细胞分辨率的跨越。这些技术可同时检测基因表达（scRNA-seq）、染色质可及性（scATAC-seq）、免疫受体（scVDJ-seq）等多组学模态，揭示宿主与病毒基因的共表达网络。例如，对淋巴母细胞系（LCL）的研究发现EBV感染的B细胞存在连续转录状态，从静止记忆B细胞到浆母细胞分化轨迹，且感染程序具有株系特异性（如EBV 1型与2型诱导不同细胞表型）。在原发性感染模型中，时间分辨单细胞多组学捕捉到B细胞从初始激活到 germinal center（GC）样状态的动态转换，并鉴定出非经典途径感染的T-bet+CXCR3+非典型B细胞（ABC），这类细胞在多发性硬化症（MS）等自身免疫病中富集。
实验模型——B细胞
EBV感染的B细胞模型是单细胞研究的经典体系。早期研究发现LCL中仅少数细胞携带病毒颗粒，暗示感染异质性。现代单细胞技术进一步揭示LCL中存在潜伏（EBNA1+）和裂解（BZLF1+）细胞亚群，且潜伏期细胞可表现为GC B细胞、活化B细胞或浆细胞样状态。值得注意的是，EBV核抗原LP（EBNA-LP）的缺失会增强细胞内在抗病毒反应（如SP140L上调），表明病毒蛋白可调控宿主防御通路。在裂解诱导的伯基特淋巴瘤（BL）细胞系中，单细胞转录组发现部分细胞呈现“流产性裂解”状态，伴有NF-κB和IRF3通路激活，而完全裂解的细胞则出现宿主基因重编程（如SOX2表达）。
上皮细胞体外实验模型
上皮细胞感染模型的研究相对有限，但已有工作利用气液界面（ALI）培养模拟鼻咽上皮，发现EBV可感染基底细胞、纤毛细胞等多种上皮亚型，其中表层细胞倾向裂解程序。在鼻咽癌（NPC）细胞系中，单细胞测序显示对裂解诱导不敏感的细胞高表达干细胞标志物SOX2，提示肿瘤干细胞样群体可能抵抗病毒裂解激活。
临床样本——淋巴瘤与上皮癌
在霍奇金淋巴瘤（cHL）、弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）等肿瘤中，单细胞分析揭示EBV+肿瘤细胞与免疫微环境（TME）的相互作用：例如，EBV+cHL富集LAG3+T细胞，NPC的TME中则存在三级淋巴结构（TLS）和克隆扩增的B细胞。在鼻咽癌（NPC）中，空间转录组证实恶性细胞可下调MHC分子，并招募耗竭性CD8+T细胞（LAG3+TIM3+）。此外，胃癌（GA）的EBV+肿瘤显示淋巴细胞浸润增加及LAG3免疫检查点分子上调。
自身免疫与炎症疾病
在MS患者中，单细胞VDJ测序发现B细胞受体（BCR）可交叉识别EBV核抗原1（EBNA1）与神经胶质细胞粘附分子（GlialCAM），提示分子模拟机制。CAEBV（慢性活动性EBV感染）患者的外周血单核细胞（PBMC）显示病毒广泛感染造血干细胞（HSC）及髓系细胞，伴随T细胞NF-κB通路过度活化。在MIS-C（儿童多系统炎症综合征）中，TGF-β信号促进EBV再激活并抑制病毒特异性T细胞功能。
空间组学的突破
空间技术如10x Visium、CODEX成像等揭示了EBV+细胞的空间分布规律：在传染性单核细胞增多症（IM）扁桃体中，LMP1+B细胞位于生发中心外区，其周边聚集耗竭表型（LAG3+TIM3+）的T细胞，形成免疫抑制微环境。
未来方向
当前挑战包括提高病毒转录本检测灵敏度、降低成本以扩大临床应用，以及整合多组学数据构建宿主-病毒互作网络。未来单细胞功能筛选（如CRISPR扰动）与空间动态追踪将有望阐明EBV致病机制的时空逻辑，为个体化治疗提供新靶点。
