RNF26通过降解GRP78并引发内质网应激（ER Stress），调节肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma）的肿瘤免疫原性

《Drug Resistance Updates》：RNF26 regulating Tumor Immunogenicity of Hepatocellular carcinoma by Degrading GRP78 and Instigating ER Stress

探究RNF26调控肝细胞癌免疫原性的分子机制及其在免疫抑制中的双重作用。摘要通过多组学分析发现RNF26在免疫冷肿瘤中高表达，受JAK-STAT3通路调控，通过泛素化降解内质网伴侣GRP78引发持续性内质网应激，抑制MHC-I抗原呈递并上调PD-L1表达，导致CD8+ T细胞浸润减少和功能耗竭，阻断内质网应激可逆转免疫抑制。

　　

Jiajing Luo|Han Zhuo|Minghui Zheng|Yi Fang|Xuran Wang|Yangyang Jin|Yaoyao Li|Siyu Du|Jie Wang|Cailin Xue|Runqiu Jiang|Gang Li

南京大学医学院，中国南京

摘要

目的

研究E3泛素连接酶RNF26在调节肝细胞癌（HCC）免疫原性中的作用及其分子机制。

方法

我们将具有不同免疫原性的临床HCC样本的多组学分析结果整合起来，利用肝细胞特异性Rnf26敲除小鼠建立了HCC模型，并采用体外3D肿瘤-T细胞共培养系统、RNA-seq、分子相互作用检测以及药理学抑制方法，系统地研究了RNF26对T细胞功能、抗原呈递和内质网（ER）应激的调节作用。

结果

RNF26在免疫“冷”型HCC中高表达，其转录受到炎症相关的JAK-STAT3轴的直接调控。在HCC细胞中，RNF26通过K48连接的多聚泛素化作用降解内质网伴侣蛋白GRP78，从而引发持续的内质网应激。这导致MHC-I抗原呈递减少和PD-L1表达增加。这种机制在体内和体外模型中均抑制了CD8⁺ T细胞的浸润，促进了T细胞耗竭，并推动了免疫逃逸。抑制内质网应激可以逆转RNF26介导的免疫抑制表型。

结论

RNF26是一个关键的分子节点，它将炎症微环境与HCC中的免疫抑制联系起来。通过泛素化并降解GRP78来引发内质网应激，RNF26同时调节抗原呈递和免疫检查点的表达。针对RNF26-GRP78轴可能是逆转HCC免疫抵抗和增强免疫治疗效果的有前景的新策略。

引言

肝细胞癌（HCC）是全球主要的癌症负担之一；肝癌是全球第六大常见恶性肿瘤，也是癌症相关死亡的第三大原因（Sung等人，2021年）。绝大多数HCC病例发生在慢性炎症的肝脏中（例如由乙型/丙型肝炎或肝硬化引起），这突显了持续炎症与肝癌发生之间的关联（Jeng等人，2023年）。尽管治疗方法有所进展，但许多HCC肿瘤仍然对治疗具有抗性：靶向治疗和免疫检查点治疗仅对部分患者有效，部分原因是HCC经常表现出免疫抑制的“冷”肿瘤微环境（Chan等人，2025年；Liu等人，2025年；Pinter等人，2023年；Yuen等人，2023年）。实际上，HCC肿瘤通常以T细胞浸润稀少和高度免疫抑制信号为特征，这严重限制了抗肿瘤免疫的效果（Donne和Lujambio，2023年；Elmetwalli，2025年；Xu等人，2025年）。

HCC中的肿瘤免疫逃逸通常涉及损害抗原呈递和上调抑制性检查点（Huang等人，2024年）。CD8⁺ T细胞通过肽-MHC I类复合物识别恶性细胞，但许多侵袭性肿瘤会下调MHC-I以逃避检测（Granados等人，2009年；Li等人，2024年）。值得注意的是，内质网应激——炎症和快速生长肿瘤细胞的特征——会直接破坏这一过程：未折叠蛋白反应（UPR）的激活会损害MHC-I肽配体的生成并减少表面MHC-I的表达（Granados等人，2009年）。同时，内质网应激信号可以增强免疫检查点的表达（Yuan等人，2022年）。例如，UPR的IRE1α–XBP1分支已被证明可以在肿瘤微环境中上调PD-L1的表达（Batista等人，2020年）。因此，持续的内质网应激可以同时减弱抗原呈递并增强抑制性信号，从而协同抑制CD8⁺ T细胞的免疫反应。

泛素-蛋白酶体途径在调节癌症中的抗原呈递和检查点途径中起着复杂的作用（Gao等人，2023年）。E3泛素连接酶在这些过程中赋予特异性，其中一些已被发现与免疫调节和HCC进展有关（Ji等人，2021年；Luo等人，2024年；Zhao等人，2022年）。在这方面，RNF26是一种跨膜RING家族E3连接酶。RNF26可以结合核周vimentin纤维，整合内质网和内体对蛋白毒性应激的反应（Cremer等人，2023年；Strzyz，2023年）。最初报道RNF26可以招募并泛素化支架蛋白p62，控制核周囊泡的定位（Jongsma等人，2016年）。有趣的是，与正常细胞相比，RNF26在多种癌细胞系和膀胱癌组织中过度表达，表明其具有致癌作用（Yao等人，2024年；Yi等人，2021年）。然而，RNF26在HCC中的功能——尤其是其对肿瘤免疫原性的潜在影响——尚未得到充分研究。

在这项研究中，我们探讨了RNF26作为HCC中炎症与免疫逃逸之间新联系的作用。我们发现炎症细胞因子信号（通过JAK/STAT3）驱动肿瘤细胞中RNF26的表达，而RNF26反过来又泛素化主要的内质网伴侣蛋白GRP78，以维持适应不良的内质网应激。这种RNF26介导的UPR激活同时抑制了MHC-I抗原呈递并增加了PD-L1的水平，导致CD8⁺ T细胞的排斥和耗竭。我们的发现将RNF26确定为肿瘤免疫原性的一个分子检查点，并表明靶向RNF26–GRP78轴可能恢复HCC中的抗原呈递并改善免疫治疗效果。

部分内容

细胞培养

三种肝癌细胞系——Hepa1-6、Hep3B和HuH7——在含有10% FBS（WISENT Corporation，产品编号319-005-CL）的DMEM培养基（WISENT Corporation，产品编号319-005-CL）中，在标准条件下（37℃，5% CO₂，湿润培养箱中）进行培养，并通过胰蛋白酶消化（WISENT Corporation，产品编号325-043-EL）进行常规传代。Hepa1-6（产品编号TCM39）、Hep3B（产品编号SCSP-5045）和HuH7（产品编号TCHu182）细胞系来源于国家认证细胞库。

人类样本

本研究使用了...

RNF26与HCC中的免疫“冷”型和“热”型肿瘤微环境的相关性

为了识别与HCC中异质性肿瘤微环境（TME）相关的因素，我们对三对病理学上确认的“冷”型和“热”型HCC组织进行了单细胞转录组学和蛋白质组学分析。分离出的肿瘤细胞的差异表达分析显示，“冷”型肿瘤中的RNF26 mRNA水平显著较高（图1A，补充图1A，B）。单细胞表达图进一步证实了“冷”型区域肿瘤细胞中RNF26的特异性富集，表明...

讨论

在本研究中，我们报告了RNF26这种由炎症上调的E3泛素连接酶驱动HCC中的免疫“冷”表型。多组学分析揭示了RNF26与肿瘤免疫环境的特异性联系。机制上，RNF26结合并泛素化GRP78，从而促进内质网应激，导致肿瘤抗原性降低，通过下调MHC-I及相关抗原呈递机制实现。

肿瘤细胞采用多种机制进行免疫逃逸，包括损害抗原...

缩写

HCC：肝细胞癌；RNF26：Ring Finger蛋白26；GRP78：葡萄糖调节蛋白78；OVA：卵白蛋白；DEN：二乙基亚硝胺；CCL4：四氯化碳；CD-HFD：胆碱缺乏高脂饮食；scRNA-seq：单细胞RNA测序；LDH：乳酸脱氢酶；OT-1：OVA特异性T细胞受体转基因（小鼠模型）；ER：内质网；co-IP：共免疫沉淀；LC/MS：液相色谱-质谱；CHX：环己酰亚胺；MFI：平均荧光强度；

伦理批准和参与同意

本研究获得了南京医科大学江苏省肿瘤医院的伦理委员会批准。

未引用的参考文献

(Huang等人，2024年)

资助

本研究得到了江苏省肿瘤医院科研项目（项目编号YSZD202404，负责人LG）和中国国家自然科学基金（项目编号82472819，负责人JR）的支持。

CRediT作者贡献声明

Jie Wang：方法学研究。Siyu Du：监督，方法学研究。Yaoyao Li：可视化，方法学研究。Yangyang Jin：软件开发，实验研究。Xuran Wang：验证，数据分析。Yi Fang：可视化，监督，数据分析。Minghui Zheng：验证，监督，方法学研究，实验研究。Han Zhuo：验证，方法学研究，数据分析，数据管理。Gang Li：撰写-审稿与编辑，监督，项目管理，资金获取，数据分析，概念构思。

利益冲突声明

作者声明他们没有已知的竞争性财务利益或个人关系可能影响本文所述的工作。

致谢

感谢所有作者对这项研究的贡献。

出版同意

所有作者均已同意发表。

利益冲突

所有作者声明没有竞争性利益。