滤泡辅助样γδ T细胞通过促进浆细胞分化加剧白塞病自身抗体产生

《Frontiers in Immunology》：Follicular helper-like γδ T cells promote plasma cell differentiation in Beh?et’s disease

本研究发现白塞病（BD）患者体内滤泡辅助样Vδ2 T细胞（CXCR5+PD-1+）通过高表达ICOS、CD40L等共刺激分子及多种细胞因子（IL-4/IL-10/IL-17等），直接促进B细胞增殖分化为浆细胞，并显著提升抗HSP60自身抗体水平。该研究揭示了γδ T细胞在BD体液免疫失调中的新机制，为靶向治疗提供了理论依据。

　　

1 Introduction

白塞病（Beh?et’s disease, BD）是一种病因不明的系统性血管炎，以反复发作的口腔和生殖器溃疡为特征，可累及眼部、血管和神经系统，未治疗者死亡率达5%。发病机制与遗传易感个体受感染或环境因素触发免疫稳态失衡相关。既往研究表明固有免疫和适应性免疫均参与BD病理过程，其中γδ T细胞和B细胞的表型异常被广泛报道，但二者如何相互作用促进自身抗体产生尚不明确。γδ T细胞分为上皮屏障富集的Vδ1亚群和外周血主导的Vδ2亚群，后者能响应病原菌衍生的磷酸抗原（如HMB-PP），并通过表达ICOS、CXCR5、PD-1等分子调控B细胞功能。热休克蛋白60（HSP60）作为自身抗原靶点，其分子模拟机制可能参与BD自身抗体产生。

2 Methods

研究纳入75例BD患者（黏膜皮肤或眼部表型）和41例健康对照（HC）。通过流式细胞术分析外周血单核细胞（PBMC）中γδ T细胞和B细胞表型，建立体外细胞培养体系评估浆细胞分化，并采用ELISA检测血清和培养上清中抗HSP60自身抗体水平。使用HMB-PP特异性激活Vδ2 T细胞，通过细胞追踪染料CMFDA评估增殖，Luminex多因子检测分析细胞因子（IL-4、IL-10、IL-17、IL-21、CXCL13、IFN-γ、TNF-α）动态变化。

3 Results

3.1 Altered frequency and functional profiles of B-cells and γδT-cells in BD patients with active disease

活动期BD患者外周血CD19⁺B细胞比例显著降低（活动期5.5% vs HC 10.11%），而CD3⁺T细胞比例升高（活动期74.65% vs HC 63.5%）。Vδ2 T细胞中CXCR5⁺PD-1⁺双阳性细胞频率在活动期BD显著增加（0.42% vs HC 0.13%），且Vδ1 T细胞CD40L表达及Vδ2 T细胞PD-1表达均上调，提示滤泡辅助样功能状态活化。

3.2 Increased CXCR5⁺PD-1⁺double positive Vδ2T-cell frequencies in BD patients with active disease

CXCR5⁺PD-1⁺Vδ2 T细胞的增加与疾病活动性而非临床表型相关。体外细胞因子检测显示，BD患者Vδ2 T细胞在PMA/离子霉素刺激下产生IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-21的能力与HC无显著差异，但HMB-PP特异性激活后呈现动态表达特征。

3.3 Vδ2T Tfh-like cells are enriched in BD and promote B-cell proliferation in vitro

HMB-PP刺激5天后，BD患者Vδ2 T细胞扩增显著（活动期11.4% vs 未刺激2.53%），且CXCR5⁺PD-1⁺细胞 fold change 在BD组持续升高（第5天BD 5.9% vs HC 2.4%）。Tfh标记分子表达动态分析显示，BD组CXCR5和ICOS的 fold change 在第3-5天显著高于HC，而CD40L表达先降后升，提示活化轨迹异常。

3.4 Activated Vδ2 cells with Tfh-like functional profile support B cell transition to a plasma cell profile in BD

HMB-PP刺激后，活动期BD患者B细胞增殖率显著升高（32.1% vs 未刺激4.6%），浆细胞（CD19⁺CD27⁺CD38^hi）分化比例增加（10.85% vs HC 6.4%），且IRF-4^hiPAX-5^loB细胞频率上升（25.13% vs HC 15.81%）。培养上清中IL-4、IL-17、CXCL13、IFN-γ、TNF-α等浆细胞分化相关因子在刺激早期（第1天）于BD组显著升高。

3.5 Anti-HSP60 autoantibodies are increased in patients with BD

活动期BD患者血清抗HSP60自身抗体水平显著高于静止期及HC（212.5 ng/mL vs HC 74.36 ng/mL）。体外培养中，HMB-PP刺激后眼部表型BD患者上清抗HSP60抗体升高尤为明显（3.25 ng/mL vs 黏膜皮肤表型0.3 ng/mL），提示γδ T细胞活化可驱动特异性自身抗体产生。

4 Discussion

本研究首次揭示BD患者Vδ2 T细胞通过获得滤泡辅助样表型，直接促进B细胞分化和自身抗体产生。其机制涉及ICOS/CD40L共刺激、多因子网络（IL-4/IL-10/IL-21等）及转录因子IRF-4/PAX-5调控。抗HSP60抗体与疾病活动性及眼部表型关联，支持γδ T细胞在BD体液免疫失调中的核心作用。研究局限性包括患者样本异质性和药物干预影响，未来需通过分选细胞共培养及组织转录组学深入探索直接作用机制。

5 Conclusions

γδ T细胞作为BD中新型B细胞辅助者，其滤泡辅助样功能状态为自身抗体产生提供了新机制。靶向该通路或为BD治疗提供新策略。