《Frontiers in Immunology》：A rabbit anti-human CD38 antibody for eliminating daratumumab and isatuximab interference in immunohematology testing
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本文开发了一种新型重组兔抗人CD38单克隆抗体D2，通过竞争性结合红细胞（RBC）表面CD38抗原，有效消除多发性骨髓瘤（MM）治疗药物达雷妥尤单抗（DARA）和伊沙妥昔单抗（ISA）在间接抗人球蛋白试验（IAT）中引起的泛凝集现象。该抗体在10分钟内即可完全阻断治疗性抗体干扰，且不影响KEL、YT等重要血型抗原的检测灵敏度，为输血前检测提供了优于二硫苏糖醇（DTT）的解决方案。
引言
单克隆抗体（mAbs）因其特异性强、半衰期长和安全性好等特点，已成为多种疾病的重要治疗手段。抗CD38单克隆抗体如达雷妥尤单抗（DARA）和伊沙妥昔单抗（ISA）在多发性骨髓瘤（MM）等疾病治疗中表现出显著疗效，但其可结合红细胞（RBCs）表面的CD38抗原，导致间接抗人球蛋白试验（IAT）出现泛凝集，干扰输血前抗体筛查和交叉配血。尤其对于常需输血支持的MM患者，解决这种干扰具有重要临床意义。目前常用的二硫苏糖醇（DTT）处理法会破坏KEL、YT等多个重要血型抗原系统，且操作繁琐、影响红细胞稳定性。其他替代方法如可溶性CD38、抗独特型抗体等也存在成本高、特异性窄或实用性差等局限。
材料与方法
研究通过免疫新西兰白兔获得重组人CD38-His蛋白，采用流式细胞术分选抗原特异性B细胞，经单细胞RT-PCR、基因克隆和表达，筛选出两株兔抗人CD38单克隆抗体D2和A3。通过ELISA和ForteBio Octet系统评估抗体亲和力，竞争实验显示D2与DARA识别CD38的相同表位，而A3结合不同表位。流式细胞术证实D2可剂量依赖性结合红细胞天然CD38，A3则无此能力。免疫血液学评估采用49例患者临床样本，通过IAT比较D2与DTT的处理效果，并分析其对血型抗原和不规则抗体检测的影响。
结果
D2表现出高亲和力（KD=0.3822 nM），能有效阻断DARA和ISA与红细胞CD38的结合。优化实验表明，每微升压积红细胞加入3微升1毫克/毫升D2，室温孵育10分钟即可完全消除治疗抗体引起的泛凝集。与DTT处理相比，D2能完整保留D、C、E、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb等21个血型系统的抗原活性。在添加DARA/ISA的临床样本中，D2处理后的红细胞仍能准确检测出抗-D、抗-E、抗-K等10余种不规则抗体，且灵敏度未受影响。对49例患者样本的测试显示，D2消除干扰的成功率达100%，而DTT处理组有10例样本仍存在残余凝集。稳定性实验证实D2在4°C储存6个月后仍保持完全活性。
讨论
D2通过抗原掩蔽（AMIAT）策略，在不破坏红细胞抗原结构的前提下实现特异性干扰消除。其兔源Fc段不与抗人球蛋白试剂反应，避免了假阳性干扰。相较于DaraEx等现有试剂，D2具有广谱性（同时覆盖DARA和ISA）、操作简便（无需洗涤步骤）和兼容性强（适用于凝胶卡等多种检测系统）的优势。研究还发现，疾病进展期患者由于药物清除延迟，易出现DTT处理后的残余凝集，而D2不受此影响。未来需进一步验证D2对新型CD38靶向药物的适用性，并可拓展至CD47等可能引起类似干扰的靶点。
结论
兔抗人CD38单克隆抗体D2为抗CD38疗法相关的输血检测干扰提供了高效、安全的解决方案。其抗原保留特性、快速反应速度和优良稳定性，使之有望成为输血实验室的常规工具，提升接受靶向治疗患者的用血安全。
