《Frontiers in Immunology》：MSC-derived microvesicles inhibit the progression of arthritis in a murine model of preclinical rheumatoid arthritis
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本文创新性建立模拟人类Pre-RA病理特征的Pre-CIA小鼠模型，证实MSC-MVs通过调节T细胞亚群平衡（Th1/Th2、Th17/Treg）、降低促炎因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）和自身抗体（抗CCP、抗CII）水平，有效阻止关节炎进展，为RA早期干预提供新型治疗策略。
研究背景与意义
类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）作为一种慢性系统性自身免疫疾病，以侵蚀性关节炎为主要特征，全球患病率达0.5%-1%。其发病涉及遗传易感性、环境因素及免疫失调等多重机制，表现为滑膜增生、炎性细胞因子异常分泌及T/B细胞过度活化。欧洲抗风湿病联盟（EULAR）于2012年提出临床前类风湿性关节炎（Preclinical RA, Pre-RA）概念，将其定义为典型RA症状出现前的关键阶段。在Pre-RA阶段，自身免疫异常已开始活跃，如抗瓜氨酸化蛋白抗体（ACPAs）可在RA确诊前十余年检出，这为早期诊断和干预提供重要窗口。然而，由于伦理考量及传统药物的不良反应，目前尚未建立针对Pre-RA阶段的治疗策略。因此，开发能够模拟Pre-RA特征的动物模型，并寻找安全有效的早期干预手段成为当务之急。
Pre-CIA小鼠模型的建立与验证
本研究通过调整经典胶原诱导性关节炎（Collagen-Induced Arthritis, CIA）模型的诱导方案，成功构建了Pre-CIA小鼠模型。该模型采用低浓度II型胶原（CII，1-2 mg/mL）和低剂量结核分枝杆菌（1-2 mg/mL）乳化液，于第0天和第21天在小鼠尾基部进行皮下注射。与标准CIA模型（关节炎发生率95.45%）相比，Pre-CIA模型关节炎发生率显著降低至59.09%，且关节炎评分（CIA score）始终低于4分，呈现轻度关节炎特征。Micro-CT扫描显示Pre-CIA小鼠出现轻度骨小梁丢失和关节表面侵蚀，但破坏程度显著低于CIA组。组织病理学检查（H&E染色和萨弗拉辛O-固绿染色）进一步证实Pre-CIA小鼠存在中度滑膜增生、软骨蛋白多糖丢失及骨侵蚀，但关节整体结构保持相对完整。
免疫学与血清学特征分析
血清学检测发现Pre-CIA小鼠促炎细胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17A、CRP）水平显著升高，而抗炎因子IL-10水平下降。同时，RA特异性自身抗体（抗CCP、抗CII）滴度明显上调，但均低于CIA组。流式细胞术分析显示Pre-CIA小鼠存在系统性免疫失衡：调节性T细胞（Treg）和Th2细胞比例降低，而Th1、Th17和滤泡辅助T细胞（Tfh）比例升高，呈现Th1/Th2和Th17/Treg平衡破坏。这些免疫特征与人类Pre-RA的免疫异常高度吻合。
LPS诱导疾病进展的验证
为模拟环境因素触发的疾病进展，研究者在第30天对Pre-CIA小鼠腹腔注射脂多糖（LPS，25-50 μg）。结果显示，LPS注射后24-48小时内，Pre-CIA小鼠关节炎评分迅速升高至CIA水平，关节肿胀明显加剧，Micro-CT显示关节破坏显著加重。这一“二次打击”实验证实Pre-CIA模型具有向典型CIA进展的潜力，与临床中Pre-RA患者在某些诱因下发展为典型RA的过程相似。
MSC-MVs的治疗作用及机制
研究者从人间充质干细胞（MSCs）培养上清中通过差速离心法提取微囊泡（MVs），经纳米颗粒跟踪分析和透射电镜鉴定其粒径为100-1000 nm。在Pre-CIA模型建立后（第21天起），每周静脉注射108个MVs，连续4周。活体荧光成像显示DiI标记的MVs在关节部位富集。治疗结果显示，MVs处理组关节炎评分降至零，体重逐渐恢复，关节肿胀完全消退。Micro-CT和病理学分析表明MVs治疗显著保护了骨小梁结构，减轻了滑膜增生和软骨破坏。ELISA检测发现血清抗CII抗体和CRP水平显著降低。流式细胞术进一步揭示MVs恢复了免疫平衡：Tfh和Th1细胞比例下降，Treg和Th2细胞比例上升，Th17细胞比例降低。
研究结论与临床意义
本研究成功建立的Pre-CIA小鼠模型较好地模拟了人类Pre-RA的免疫病理特征，为研究RA早期发病机制和干预策略提供了可靠平台。MSC-MVs通过调节免疫平衡、减轻炎症反应和保护关节结构，有效阻止了Pre-CIA向CIA的进展。这一发现不仅深化了对RA早期事件的理解，也为开发针对Pre-RA的安全有效的预防性治疗策略提供了新思路，具有重要的临床转化价值。
