《Frontiers in Immunology》：Absolute quantification of microRNA miR-875-5p in temporal artery biopsies and its biomarker potential for giant cell arteritis
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本研究通过数字PCR（dPCR）对巨细胞动脉炎（GCA）患者颞动脉活检（TAB）中低丰度miR-875-5p进行绝对定量，发现其在组织学阳性TAB中表达显著升高，且与血管壁炎症程度、免疫细胞浸润及临床特征（如颌跛行、血管狭窄等）显著相关。miR-875-5p拷贝数在区分GCA患者与对照组时表现出高诊断效能（AUC=0.973），提示其作为GCA血管炎症评估支持性生物标志物的潜力。
1 引言
巨细胞动脉炎（Giant Cell Arteritis, GCA）是一种好发于50岁以上人群的大中型血管原发性系统性血管炎，以透壁性炎症和血管壁重塑为特征。近年研究表明，微RNA（microRNA, miRNA）表达失调在GCA血管炎症微环境形成中起关键作用。本研究团队前期通过定量实时PCR（qPCR）在初治GCA患者的颞动脉活检（Temporal Artery Biopsies, TAB）中发现8种GCA特异性miRNA，其中miR-875-5p因稳定性及特异性突出，被选作进一步生物标志物验证对象。
2 材料与方法
2.1 患者样本
研究纳入45例经临床确诊的初治活动性GCA患者的TAB（其中29例组织学阳性，16例阴性）和19例非GCA对照者的TAB。所有样本经福尔马林固定石蜡包埋（Formalin-Fixed Paraffin-Embedded, FFPE）处理，诊断符合美国风湿病学会（ACR）标准。
2.2 分子实验
从FFPE切片中提取总RNA后，采用miRCURY LNA RT试剂盒进行逆转录。首先通过qPCR筛选miR-875-5p表达，随后使用QIAcuity One数字PCR系统进行绝对定量。以miR-362-3p和miR-500a-5p为内参，dPCR反应条件严格遵循数字MIQE指南。
2.3 组织病理与统计分析
结合既往研究数据，定量分析TAB的血管壁厚度、免疫细胞（CD3+、CD4+、CD8+T细胞、CD20+B细胞、CD68+巨噬细胞等）密度。采用Spearman相关性分析、Mann-Whitney U检验和ROC曲线评估miR-875-5p的诊断价值。
3 结果
3.1 miR-875-5p表达特征
qPCR检测显示miR-875-5p在83%组织学阳性TAB中表达（Cq>34），而组织学阴性GCA组和对照组仅零星检出。dPCR绝对定量揭示：组织学阳性GCA组miR-875-5p中位拷贝数为25.3拷贝/μL，显著高于组织学阴性GCA组（5.4拷贝/μL）和对照组（6.5拷贝/μL），组间差异极显著（p<0.0001）。
3.2 诊断效能分析
ROC曲线显示miR-875-5p拷贝数区分组织学阳性GCA与对照组的AUC达0.973，以13.1拷贝/μL为临界值时灵敏度86%、特异度100%；区分组织学阳性和阴性GCA的AUC为0.972（临界值13.5拷贝/μL）。然而，其在区分组织学阴性GCA与对照组时无诊断价值（AUC=0.428）。
3.3 与病理临床参数关联
miR-875-5p拷贝数与所有9项TAB组织病理参数均显著正相关（p<0.0001），其中与血管内中膜厚度、CD3+T细胞、CD8+T细胞及CD68+巨噬细胞密度相关性最强（ρ≥0.700）。临床特征分析表明，miR-875-5p高表达与颌跛行、颞动脉临床改变、超声晕征和血管狭窄/闭塞显著相关。
4 讨论
本研究首次实现GCA受累动脉组织中低丰度miRNA的dPCR绝对定量，证实miR-875-5p可作为血管壁炎症的辅助生物标志物。其表达与NOTCH信号通路潜在关联提示可能参与血管平滑肌细胞表型转化。尽管miR-875-5p单独应用灵敏度有限，但未来可整合多miRNA面板提升GCA诊断及预后评估效能。需进一步探索其在循环血液中的检测可行性，以推动其向临床转化应用。
