新型双信号蛋白DSP216通过靶向HLA-G和CD47双重免疫检查点促进先天抗癌免疫

《Advanced Science》：Selective Targeting of Immune Checkpoints HLA-G and CD47 Using Novel Dual Signaling Protein DSP216 Promotes Innate Anticancer Immunity

本综述系统阐述了新型双信号蛋白DSP216（Dual Signaling Protein 216）通过协同靶向免疫检查点HLA-G和CD47，激活先天免疫应答的创新机制。研究证实DSP216采用"AND-gate"（与门）结合模式，特异性识别HLA-G+/CD47+肿瘤细胞，显著降低对正常细胞的脱靶效应。功能实验表明其能有效阻断CD47/SIRPα和HLA-G/LILRB1/2信号轴，促进巨噬细胞吞噬活化和NK细胞毒性，为下一代免疫检查点抑制剂（ICI）开发提供了新策略。

　　

引言背景

免疫检查点抑制剂（ICI）虽已改善癌症治疗效果，但多数患者和肿瘤类型对现有疗法无应答。双信号蛋白（DSP）平台通过融合两个蛋白的胞外域（ECD）创造新型免疫治疗功能，如DSP107融合SIRPα和4-1BBL结构域。本研究聚焦DSP216，其通过协同靶向HLA-G和CD47检查点，旨在解决现有ICI的局限性。

DSP216的优化设计

DSP216由LILRB2和SIRPα的ECD分别融合至异源二聚化IgG1 Fc构成。通过计算化学优化LILRB2结构域，发现V78R突变可显著增强与HLA-G的亲和力。实验证实DSP216^V78R对721.221^HLA-G细胞的结合力提高5倍，对HT1080^HLA-G和JEG-3细胞提高2倍。竞争实验显示HLA-G抗体对DSP216^V78R结合的抑制率达91%（721.221^HLA-G），表明该突变成功增强了LILRB2/HLA-G相互作用。

特异性结合验证

DSP216展现"AND-gate"结合特性：对CD47单阳性细胞（如HT1080^wt）结合微弱，而对HLA-G⁺/CD47⁺细胞结合显著增强。在混合细胞（HT1080^HLA-G、PBMC、RBC）中，DSP216优先结合肿瘤细胞，对单核细胞（因CD64表达）结合较高，但对T细胞/NK细胞结合较低，且不影响PBMC存活率。竞争实验证实同时阻断CD47和HLA-G可完全抑制DSP216结合。

巨噬细胞功能调控

HLA-G可诱导巨噬细胞向M2表型极化（CD163表达上调）。与HT1080^HLA-G共培养时，DSP216剂量依赖性抑制CD163上调，并促进IL-6和TNFα分泌，表明其可逆转免疫抑制微环境。与HLA-G抗体相比，DSP216对CD14表达无影响，提示二者作用机制存在差异。

吞噬作用增强

吞噬实验显示，DSP216的" inactive" Fc版本（DSP216i）和"active" Fc版本（DSP216a）均能剂量依赖性促进巨噬细胞对721.221^HLA-G和JEG-3细胞的吞噬，但对CD47单阳性细胞无显著作用。CD47抗体可增强对721.221^EV的吞噬，而DSP216仅对双阳性细胞有效，凸显其靶向特异性。

NK细胞活化机制

在CD16报告实验中，DSP216a（非DSP216i）可激活Jurkat-Lucia^TMNFAT-CD16细胞发光信号，且仅在与HT1080^HLA-G共培养时显著。NK杀伤实验中，DSP216i和DSP216a均能逆转HLA-G对NK细胞的抑制，增强对721.221^HLA-G的杀伤。DSP216a通过协同阻断检查点及激活CD16，进一步强化细胞毒性。

讨论与展望

DSP216相比单一靶向抗体（如HLA-G抗体TTX-080、LILRB1/2抗体BND-22/JTX-8064）具有多重优势：可中和多种HLA-G异构体，避免对经典HLA分子的脱靶效应。其AND-gate设计减少了对红细胞（RBC）等正常细胞的结合，可能克服如magrolimab的贫血副作用。临床前数据支持其推进至临床试验，尤其适用于HLA-G不保守的动物模型替代策略。

实验方法概要

研究采用ELISA、流式细胞术、吞噬报告实验、细胞共培养等技术验证DSP216功能。蛋白通过Expi293F细胞表达，经蛋白A层析和尺寸排阻色谱（SEC）纯化。统计学分析使用GraphPad Prism，数据以均值±标准差表示。

结论总结

DSP216作为新型双检查点抑制剂，通过特异性靶向HLA-G/CD47共表达肿瘤细胞，协同激活巨噬细胞和NK细胞介导的先天免疫，为精准免疫治疗提供了新方向。