实时定量PCR与Ct值在耶氏肺孢子菌肺炎诊断中的性能特征及临床应用研究

《Infection and Drug Resistance》：Performance Characteristics of Real-Time Quantitative PCR and Cycle Threshold (Ct) Values for the Diagnosis of Pneumocystis jirovecii pneumonia in Hospitalized Patients

本研究通过回顾性分析249例疑似耶氏肺孢子菌肺炎（PCP）住院患者的临床资料，系统评估了实时定量PCR（qPCR）循环阈值（Ct）与β-D-葡聚糖（BDG）等生物标志物的诊断效能。研究发现qPCR在区分PCP与非PCP时曲线下面积（AUC）达0.98，最佳Ct截断值为35.305，灵敏度与特异性分别为95%和99%，同时明确PCP组淋巴细胞百分比与计数显著降低而BDG水平升高。研究为PCP的精准诊断提供了关键实验室依据，对优化免疫抑制患者管理策略具有重要临床意义。

研究背景与目的

耶氏肺孢子菌肺炎（Pneumocystis jirovecii pneumonia, PCP）是免疫抑制患者常见的机会性感染，其诊断依赖微生物学与临床特征的综合判断。本研究旨在通过评估实时定量PCR（qPCR）循环阈值（Ct）与血清生物标志物在PCP诊断中的性能，建立更精准的实验室诊断标准。

研究对象与方法

研究回顾性纳入2024年至2025年绍兴文理学院附属中心医院249例疑似呼吸道感染患者，最终128例纳入分析，其中明确PCP组8例、临床诊断PCP组32例、非PCP组88例。所有患者均接受支气管肺泡灌洗液（BALF）的Grocott六胺银染色镜检与qPCR检测（靶基因为mtLSU rRNA），并依据EORTC/MSGERC（2020）标准进行分组。

关键发现

明确PCP组的淋巴细胞百分比（均值5.25%）、绝对计数（均值0.51×10⁹/L）均显著低于其他两组（p=0.003，p=0.009），而血清BDG水平（均值133.67 pg/mL）显著升高（p<0.001）。qPCR检测显示，以Ct值35.305为截点时，区分PCP与非PCP的灵敏度达95%，特异性为99%（AUC=0.98）。进一步分析发现，Ct值与淋巴细胞百分比呈正相关（r=0.360，p=0.022），与乳酸脱氢酶（LDH）水平呈负相关（r=?0.314，p=0.048）。

诊断技术比较

除qPCR外，研究还提及数字PCR（ddPCR）与宏基因组测序（mNGS）等新技术在提高检测灵敏度与鉴别混合感染中的潜力，但指出qPCR因操作标准化、成本可控更适合临床推广。同时强调qPCR结果需结合临床背景解读，以避免无症状定植导致的假阳性。

临床意义与局限

本研究首次在大样本人群中量化了PCP患者的免疫特征与病原负荷关系，证实qPCR Ct值与BDG联合检测可显著提升诊断准确性。研究局限性包括单中心回顾性设计、明确PCP病例数较少，以及不同实验室qPCR方法尚未统一标准化。

结论

qPCR Ct值与BDG作为互补生物标志物，可有效区分PCP活动感染与定植，为免疫抑制患者呼吸道感染的精准管理提供重要实验室依据。未来需通过多中心前瞻性研究验证当前截断值的普适性，并探索新兴分子诊断技术的临床转化路径。