MASM通过Wnt5a/FZD5途径调控星形胶质细胞活化抗多发性硬化症的机制研究

　　

摘要: 通过采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白MOG_35-55多肽联合百日咳毒素建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE) 小鼠模型, 研究13-甲氨基-18-硫代苦参碱(MASM) 对EAE小鼠的治疗作用及可能机制。采用Kono's 5分法进行神经功能评分, 将评分为0.5~3.5分的小鼠随机分为EAE组、MASM低、中、高剂量(1.5、3、6 mg·kg^-1) 及阳性对照组(芬戈莫德组, 1.0 mg·kg^-1), 另设一组正常对照组, 分组当天开始给药, 1次/天, 连续21天; HE染色观察小鼠脊髓组织的病理变化; 电镜法观察脊髓髓鞘超微结构的完整性; ELISA法检测血清中转化生长因子-β1 (TGF-β1) 和单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1) 的含量; qRT-PCR检测脊髓中抗原呈递相关基因H2T23的mRNA表达水平; 采用AutoDock软件对MASM和人卷曲同源物5 (FZD5) 蛋白进行分子对接; Western blot法检测脊髓中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、补体C3、糖蛋白无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族成员5a (Wnt5a)、FZD5、蛋白激酶Cα (PKCα) 蛋白表达情况及糖原合成酶激酶3β (GSK3β) 磷酸化水平。结果显示, MASM能明显改善EAE小鼠神经功能损伤及炎症细胞浸润、脊髓脱髓鞘等病理变化; 还可明显下调EAE小鼠脊髓中星形胶质细胞活化及A1表型标志物GFAP和C3蛋白、H2T23 mRNA的表达水平(P < 0.05, P < 0.01)。MASM与FZD5具有较强的结合能力, 并可明显下调EAE小鼠脊髓中Wnt5a、FZD5、PKCα蛋白的表达量及GSK3β的磷酸化水平(P < 0.05, P < 0.01)。提示MASM可通过抑制AST活化及向A1型极化, 改善脊髓炎症反应和髓鞘脱失, 其作用与调控Wnt5a/FZD5途径的激活有关。动物实验经福建中医药大学动物伦理委员会批准(FJTCMIACUC 2023319)。