基于糖酵解通路PI3K/Akt/HIF-1α研究黄芩苷诱导RAW264.7细胞M1型极化机制

　　

摘要: M1型巨噬细胞介导的抗肿瘤免疫应答对于抑制肿瘤进展至关重要, 其功能依赖于有效的代谢重编程。本研究旨在探讨黄芩苷(baicalin) 是否通过调控PI3K/Akt/HIF-1α信号轴及其下游糖酵解代谢, 促进巨噬细胞向M1型极化。采用RAW264.7细胞模型, 通过CCK-8法检测细胞活性, 流式细胞术与免疫荧光技术分析细胞表面标志物CD86的表达; ELISA法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-alpha, TNF-α) 水平; 乳酸试剂盒检测乳酸含量; Western blot检测RAW264.7细胞中PI3K/Akt/HIF-1α糖酵解通路与糖酵解关键限速酶乳酸脱氢酶A (lactate dehydrogenase A, LDHA) 和丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase M2, PKM2) 与蛋白表达; 并利用PI3K抑制剂LY294002和糖酵解抑制剂2-DG验证黄芩苷的作用机制。结果显示, 黄芩苷在12.5~100 μmol·L^-1时对RAW264.7细胞的细胞活力无显著影响, 在100 μmol·L^-1时可显著上调RAW264.7细胞中M1型表面标志物CD86及细胞因子TNF-α的表达, 上调p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、LDHA与PKM2蛋白的表达, 同时乳酸含量升高。而加入LY294002和2-DG后, 黄芩苷对CD86的上调作用均被抑制, 相关通路蛋白表达也出现回调。本研究揭示黄芩苷通过激活PI3K/Akt/HIF-1α信号轴, 增强糖酵解代谢, 驱动巨噬细胞向M1型极化, 为其在肿瘤免疫调节及炎症相关疾病中的治疗潜力提供了新的代谢机制依据。