《Scientific Reports》：Comparing and combining xevinapant with ATR and PARP inhibition for the radiosensitization of HPV-negative HNSCC cells
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本研究针对HPV阴性头颈鳞癌（HNSCC）放疗抵抗难题，系统比较了凋亡激动剂xevinapant与DNA损伤响应（DDR）抑制剂tuvusertib（ATRi）、olaparib（PARPi）的放射增敏效果。结果表明，ATR/PARP双途径抑制在三种耐药细胞系中产生显著协同增敏效应，而xevinapant联合方案效果有限，为替代临床失败的TrilynX试验提供了新策略。
头颈鳞状细胞癌（HNSCC）是常见的恶性肿瘤类型，其中人乳头瘤病毒（HPV）阴性患者由于对放化疗的抵抗性，治疗效果常不理想。局部晚期HNSCC的标准治疗包括基于顺铂的放化疗或手术联合辅助放化疗，但治疗相关毒性大，且部分老年或体弱患者无法耐受顺铂。尽管靶向药物如西妥昔单抗（抗EGFR单抗）已被批准应用，但其联合放疗的疗效存在争议。因此，开发新的放射增敏策略成为提高HPV阴性HNSCC疗效的关键。
近年来，凋亡刺激剂xevinapant（一种SMAC模拟物）在二期临床试验中显示出优于标准放化疗的效果，但随后的三期TrilynX试验却因疗效不佳和毒性增加而终止。这一失败促使研究人员探索其他放射增敏途径，如DNA损伤响应（DDR）通路抑制。ATR（共济失调毛细血管扩张症和Rad3相关蛋白）和PARP（多聚ADP核糖聚合酶）是DDR中的关键分子，其抑制剂tuvusertib和olaparib在多种癌症中显示出潜力，但它们在HNSCC放射增敏中的作用尚需系统评估。
本研究发表于《Scientific Reports》，旨在比较xevinapant与ATR抑制剂tuvusertib、PARP抑制剂olaparib在HPV阴性HNSCC细胞中的放射增敏效果，并探索其联合应用的潜力。研究人员选用了四种放射性耐受的HPV阴性HNSCC细胞系（HSC4、UT-SCC-60A、SAS、SAT），通过细胞增殖、集落形成、细胞周期和细胞死亡分析等实验，评估了单药及联合用药对放疗的增敏作用。
关键技术方法包括：使用四种HPV阴性HNSCC细胞系进行体外实验；通过流式细胞术分析细胞周期分布和annexin V/DAPI染色检测细胞死亡；集落形成实验作为放射敏感性评估的金标准；X射线照射模拟放疗条件；数据统计采用配对双尾Student t检验。
剂量寻找用于tuvusertib
研究人员首先确定了tuvusertib的有效浓度，发现30 nM即可抑制辐射诱导的G2期阻滞，因此后续实验采用该剂量。xevinapant和olaparib则使用临床可达浓度1 μM。
抑制细胞增殖
单药处理对细胞增殖有中度抑制作用，联合用药在部分细胞系（如HSC4）中显示出协同抑制效果，但反应存在细胞系特异性。xevinapant与顺铂联用未产生普遍增强效应。
诱导细胞死亡
通过annexin V/DAPI染色分析早期凋亡和溶解性死亡，发现xevinapant在个别细胞系中增加辐射诱导的凋亡，但整体上ATR和PARP抑制剂的联合应用在HSC4细胞中效果最显著。然而，细胞死亡分析未能普遍预测这些方法的细胞毒性或放射增敏作用。
克隆形成生存
集落形成实验显示，xevinapant在部分细胞系中有中度放射增敏作用，但效果不如tuvusertib和olaparib，后者在所有四种细胞系中均诱导放射增敏。xevinapant与顺铂联用仅在SAT细胞中增强放射增敏。
放射增敏
tuvusertib和olaparib单药均比xevinapant产生更强的放射增敏效应，且二者联用在三种细胞系中导致显著协同增敏。xevinapant与其他药物联用未产生普遍增强效果。
研究结论指出，ATR和PARP抑制在HPV阴性HNSCC中比xevinapant具有更优的放射增敏潜力，尤其是双途径抑制可能为临床提供新策略。讨论部分强调，尽管xevinapant在二期试验中成功，但三期失败提示其局限性；而DDR抑制剂联合放疗在耐受剂量下可能成为替代方案，但需谨慎评估毒性。研究还呼吁加强临床前验证，避免重蹈西妥昔单抗在HPV阳性HNSCC中的失败覆辙。
总之，该研究为HPV阴性HNSCC的精准放疗提供了实验依据，推动了DDR靶向联合策略的进一步发展。
