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本刊推荐：这项前瞻性研究首次系统评估四种常用固定剂（福尔马林、PreservCyt、CytoLyt、CytoRich Red）对肺腺癌胸水细胞蜡块中三种PD-L1抗体（28-8/22C3/SP263）免疫染色的一致性和强度影响。研究发现醇类固定剂会显著降低PD-L1染色强度（p<0.001-0.007），尤其在使用低阈值（≥1%）时易导致假阴性结果，为临床标准化PD-L1免疫细胞化学（ICC）检测方案提供了关键实验依据。
研究背景
程序性死亡配体1（PD-L1）免疫细胞化学（ICC）检测在细胞蜡块（CBs）中的应用已成为肺癌免疫治疗的重要环节。与标准化福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织不同，细胞学样本存在多种制备方法和固定剂选择的差异。本研究针对转移性肺腺癌（AC）患者的恶性胸水（MPEs）样本，探讨四种固定剂（10%中性缓冲福尔马林、PreservCyt、CytoLyt、CytoRich Red）对三种PD-L1抗体（28-8、22C3、SP263）免疫反应性的影响。
材料与方法
研究前瞻性纳入33例肺腺癌胸水样本，每例制备四组匹配细胞蜡块，分别采用不同固定剂处理。通过肿瘤比例评分（TPS）和染色强度评估PD-L1表达，统计分析采用Friedman检验、McNemar检验和Wilcoxon符号秩检验，计算总体符合率（OPA）、阳性符合率（PPA）、阴性符合率（NPA）和Cohen kappa（κ）值。
研究结果
- 1.
PD-L1阳性率差异：福尔马林固定CBs的PD-L1阳性率（≥1%阈值）为72.7%-78.8%，而醇类固定剂（PreservCyt/CytoLyt）显著降低至42.4%-69.2%。在≥50%高阈值下，福尔马林组阳性率为27.3%-36.4%，醇类固定剂组仅为6.1%-30.3%。
- 2.
染色强度比较：所有醇类固定剂均导致PD-L1染色强度显著减弱（p<0.001-0.007）。福尔马林组以中强度染色（++/+++）为主，而醇类固定剂组以弱阳性（+）或阴性为主。
- 3.
一致性分析：
- •
PD-L1 SP263抗体在CytoLyt固定液中一致性最差（κ=0.382，OPA=67%）
- •
CytoRich Red与福尔马林一致性最高（κ=0.669-0.906，OPA=81%-96%）
- •
抗体22C3在≥50%阈值下表现最佳（κ=0.792-0.864）
讨论与结论
本研究首次通过匹配样本直接比较证实，醇类固定剂会系统性降低PD-L1 ICC检测的敏感性和染色强度。这种效应在低阈值（≥1%）时尤为明显，可能导致假阴性结果而影响免疫治疗决策。值得注意的是，不同醇类固定剂间存在差异：CytoRich Red的表现明显优于PreservCyt和CytoLyt。研究强调实验室在采用非福尔马林固定剂时需进行严格的方法学验证，建议优先选择与福尔马林一致性较高的固定方案，避免因前处理差异导致的生物标志物误判。
临床意义
该研究为细胞学样本PD-L1检测标准化提供了关键实验证据，提示当前临床指南中关于醇类固定剂使用的规范亟待完善。对于仅能获取细胞学标本的晚期肺癌患者，优化ICC检测流程对精准免疫治疗至关重要。
