一种基于AuPt纳米酶辅助的CRISPR/Cas12a系统，用于可视化检测病原体中的核酸

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：An AuPt nanozyme-assisted CRISPR/Cas12a system for visual nucleic acid detection of pathogens

马铃薯早斑病（ Alternaria solani）检测新方法NACD assay通过CRISPR/Cas12a与AuPt纳米酶结合实现高灵敏度（100 copies/μL）和特异性（无交叉反应），结合滤纸试纸读取系统，提供直观的现场快速诊断。

　　

摘要

由Alternaria solani引起的马铃薯早疫病对马铃薯产业构成了严重威胁。现有的A. solani检测方法往往难以同时实现简便性和准确性。研究人员开发了一种基于金-铂（AuPt）纳米酶辅助的CRISPR/Cas12a系统，称为纳米粒子酶辅助CRISPR检测（NACD检测法）。该系统结合了CRISPR的精确目标识别能力和AuPt纳米酶的酶样活性，实现了对A. solani的简便、灵敏且可视化的检测。NACD检测法通过AuPt纳米酶催化底物产生的明显颜色变化来提供可视化结果：它可以检测到每微升中含有100个A. solani 5.8S rRNA基因拷贝或10?3纳克A. solani基因组DNA的样本。该方法具有高度特异性，且未与其他三种病原体发生交叉反应。此外，采用滤纸作为读数装置，使得肉眼即可直接观察到检测结果，特别适合现场检测。总体而言，这些特性使其成为一种有效的现场诊断工具，有助于马铃薯产业更高效地管理早期病害。

图形摘要

由Alternaria solani引起的马铃薯早疫病对马铃薯产业构成了严重威胁。现有的A. solani检测方法往往难以同时实现简便性和准确性。研究人员开发了一种基于金-铂（AuPt）纳米酶辅助的CRISPR/Cas12a系统，称为纳米粒子酶辅助CRISPR检测（NACD检测法）。该系统结合了CRISPR的精确目标识别能力和AuPt纳米酶的酶样活性，实现了对A. solani的简便、灵敏且可视化的检测。NACD检测法通过AuPt纳米酶催化底物产生的明显颜色变化来提供可视化结果：它可以检测到每微升中含有100个A. solani 5.8S rRNA基因拷贝或10?3纳克A. solani基因组DNA的样本。该方法具有高度特异性，且未与其他三种病原体发生交叉反应。此外，采用滤纸作为读数装置，使得肉眼即可直接观察到检测结果，特别适合现场检测。总体而言，这些特性使其成为一种有效的现场诊断工具，有助于马铃薯产业更高效地管理早期病害。

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