《Human Pathology》：Correlation of
NPM1 Immunohistochemistry with Mutation Subtypes, Clinicopathologic Variables and Molecular Testing in AML with
NPM1 Mutation
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NPM1突变型急性髓系白血病中NPM1m免疫组化诊断价值及亚型关联性研究。通过回顾性分析36例NPM1突变病例，发现NPM1m IHC在插入突变亚型中敏感度高，呈现均质型或双色调型，其中型A突变以双色调为主，并与细胞遗传复杂型相关。研究证实NPM1m IHC可作为分子诊断的快速替代方案，但非插入型突变检测存在局限，临床预后与IHC模式无显著关联。
莎伦·库尔斯·格曼斯（Sharon Koorse Germans）、奥尔加·K·温伯格（Olga K. Weinberg）、陈薇娜（Weina Chen）、米格尔·坎图（Miguel Cantu）、陈明毅（Mingyi Chen）、德怀特·奥利弗（Dwight Oliver）、普拉萨德·科杜鲁（Prasad Koduru）、林赛·比格姆（Lindsay Bigham）
德克萨斯大学西南医学中心血液病理学系，地址：2330 Inwood Rd, EB02218F, 达拉斯, 德克萨斯州 75235-9317
摘要
背景
核磷蛋白1（NPM1）突变是急性髓系白血病（AML）的主要分子亚型之一。尽管RT-PCR和下一代测序（NGS）仍是诊断和评估微小/可测量残留疾病（MRD）的金标准，但使用单克隆抗体的NPM1突变特异性免疫组化（NPM1m IHC）提供了一种快速且经济有效的替代方法。NPM1m IHC模式与特定NPM1突变亚型之间的关联仍需进一步研究。
目的
评估NPM1m IHC在NPM1突变AML中的诊断价值，并探讨其与突变亚型、形态特征、细胞遗传学特征、共突变和临床结果之间的关联。
方法
分析了2018至2024年间确诊为NPM1突变的36例AML患者的临床病理变量、细胞遗传学数据、PCR/NGS结果以及NPM1m IHC结果，并对A型（n=28）和非A型（n=8）突变进行了亚组分析。
结果
所有插入型NPM1突变亚型均表现出NPM1m IHC阳性，存在两种不同的染色模式：均匀型和双色调型，其中双色调型在A型突变中更为常见。非A型突变更常与复杂的核型相关，并且较少出现FLT3共突变。两个亚组均观察到了单核细胞分化和杯状核形态。两组之间的生存率或缓解率无显著差异，但A型突变患者的异常增生率较高（p=0.03）。
结论
NPM1m IHC是一种敏感且及时的插入型NPM1突变替代标志物，与分子检测结果高度一致，适用于即时诊断和MRD评估。本研究揭示了不同亚型的形态和细胞遗传学特征，并强调了进一步研究非插入型NPM1突变及其检测方法的必要性。
引言
急性髓系白血病（AML）是一种遗传异质性疾病，其特征是髓系前体的克隆扩增。在众多反复出现的基因改变中，NPM1基因突变越来越受到重视，在25–30%的成人新发AML病例中可见，其中约45–60%的病例核型正常。这些突变导致核磷蛋白在细胞质中的错误定位，这是NPM1突变AML的典型特征[5]。NPM1突变AML常伴有杯状核形态，这种形态与遗传学特征之间存在明显关联[6, 7]。
NPM1突变主要为插入型，A型突变占约75–80%，而非A型突变（如B型、D型和N型）较为少见[8, 9, 10, 11]。这些变异会导致C末端序列的不同，可能影响基于抗体的检测方法并影响疾病表型[12, 13]。尽管NPM1突变的总体临床和预后影响已得到充分证实，但不同突变亚型对形态、细胞遗传学、共突变和治疗反应的具体影响仍需进一步研究。
虽然RT-PCR和NGS仍是检测的金标准，但使用针对突变NPM1蛋白的单克隆抗体的免疫组化方法提供了一种快速且经济有效的替代方案，尤其是在无法进行分子检测的情况下[14, 15, 16]。然而，大多数关于NPM1m IHC的数据集中在A型突变上，其在非A型突变中的诊断准确性尚不明确[17]。此外，不同染色模式（如均匀型与双色调型细胞质阳性）的临床意义也尚未明确。
本研究评估了NPM1m IHC在NPM1突变AML患者中的诊断价值，将其发现与突变亚型、形态特征、细胞遗传学异常、分子共突变和临床结果进行关联，特别关注IHC在典型和非典型NPM1突变AML中的快速诊断和MRD检测潜力。
方法
通过数据库搜索，确定了2018至2024年间确诊为NPM1突变的36例AML病例，这些病例均进行了相应的骨髓活检或髓系肉瘤评估。分析了临床病理特征、形态学、定性聚合酶链反应（PCR）和下一代测序（NGS）数据，并将其与不同突变亚型的NPM1m IHC结果进行了关联。25例病例接受了NPM1m IHC检测。
结果
共有36例NPM1突变AML患者纳入研究，其中28例为A型突变，8例为非A型突变（B型、D型和N型）。研究结果总结见表1。
两组患者中大多数为成人（>18岁）：A型组占96%，非A型组占88%（p = 0.33）。两组中儿童病例（<18岁）均较少（分别为4%和13%）。A型组中男性比例较高。
讨论
本研究显示，两种不同的免疫组化（IHC）模式与NPM1突变相关，提示复杂的核型可能与非A型NPM1突变亚型更常相关。与先前的观察结果一致，我们的发现再次证实了NPM1m IHC在典型插入型突变（A型、B型、D型和N型）病例中的诊断价值，但在点突变病例中则无法有效检测[17, 18, 19]。
CRediT作者贡献声明
莎伦·格曼斯（Sharon Germans）：负责撰写、审稿与编辑、初稿撰写、方法学设计及概念构思
致谢
感谢德克萨斯大学西南医学中心血液病理学系、分子诊断学系和细胞遗传学系的帮助。
