TRPV2在人类颗粒细胞样肿瘤细胞系KGN中调控细胞命运：对颗粒细胞肿瘤和大麻二酚的影响

TRPV2通道在颗粒细胞肿瘤（GCTs）中高表达（95%），其敲除通过影响细胞增殖、迁移及蛋白组学改变增强KGN细胞活性。CBD诱导GCTs凋亡依赖TRPV2直接激活及VDAC1间接作用，环孢素A阻断mPTP可完全抑制CBD效应。TRPV2或为GCT分型标志物及新型治疗靶点。

　　

摘要

背景

瞬时受体电位香草素2型（TRPV2）通道具有显著的物种依赖性激活模式和多种功能。基于先前的研究结果（这些结果显示TRPV2在人类卵巢颗粒细胞中表达），本研究在人类颗粒细胞肿瘤（GCTs）及其衍生细胞（KGN细胞）中探讨了TRPV2的活性。GCTs是一种罕见的卵巢肿瘤，目前尚无针对该肿瘤的特异性治疗方法或合适的标志物。

方法

我们分析了63个GCT样本以及KGN细胞。我们采用了免疫组化/细胞化学、RT-PCR、Western blotting技术，并测量了细胞内的Ca²⁺水平。我们研究了基于CRISPR/Cas9技术的TRPV2基因删除对细胞增殖、迁移和巨噬细胞摄取行为的影响，检测了类固醇激素生成的变化，并确定了这些细胞蛋白质组的相关变化。

结果

我们发现95%的GCT细胞表达了TRPV2。为了研究TRPV2的功能，我们使用了从GCT细胞衍生出的KGN细胞系。CRISPR/Cas9技术删除TRPV2基因后，细胞体积增大，增殖、迁移和巨噬细胞摄取行为增强，类固醇激素生成发生变化，同时这些细胞的蛋白质组也发生了相应改变。TRPV2基因的删除显著降低了细胞对大麻二酚（CBD）的敏感性；CBD是一种选择性TRPV2配体，其诱导的细胞死亡效应具有浓度和时间依赖性。然而，细胞死亡并未完全消失。对TRPV2相互作用网络的分析表明，电压依赖性阴离子通道1（VDAC1）可能是CBD的另一个作用靶点。VDAC1参与线粒体通透性转换孔（mPTP）的形成和持续开放过程，这一过程与细胞死亡相关。作为mPTP形成抑制剂的一种药物——环孢素A，显著降低了KGN细胞对CBD诱导的细胞死亡的敏感性；经过环孢素A处理的TRPV2缺失细胞几乎完全不受CBD的影响。

结论

研究结果表明TRPV2在GCT细胞中发挥作用。因此，CBD可通过直接激活TRPV2或与VDAC1相互作用导致KGN细胞死亡。TRPV2的表达可能成为区分不同类型GCT的新标志物。此外，TRPV2还代表了一个新的药物靶点。