Annexin A2 依赖的细胞外囊泡蛋白质组调节三阴性乳腺癌中转移前间质成纤维细胞的行为

三阴性乳腺癌中Annexin A2调控肿瘤源性外泌体介导的肺成纤维细胞行为促进转移机制研究。

　　

摘要

背景

三阴性乳腺癌（TNBC）是一种侵袭性较强的乳腺癌亚型，治疗选择有限，并且具有强烈的向肺部转移的趋势。肿瘤来源的细胞外囊泡（EVs）在转移前微环境中是基质重编程的关键介质。 Annexin A2（AnxA2）在TNBC中过度表达，与信号转导、细胞骨架重塑和不良预后相关，但其在塑造EV货物组成及由此产生的基质行为中的作用尚不清楚。

方法

使用差异超离心法从MDA-MB-4175（LM2）TNBC细胞（具有稳定的AnxA2敲低机制）和对照细胞的 conditioned media 中分离出EVs。通过纳米粒子追踪分析、Western blotting和冷冻电子显微镜对EVs进行了表征和验证。利用定量蛋白质组学技术对EV蛋白组进行了分析，并进行了生物信息学处理。通过功能富集和通路分析来识别因AnxA2缺失而改变的蛋白质特征。通过共聚焦成像评估了EVs被受体肺纤维细胞（MRC-5和WI-38细胞）内化的情况，并通过迁移实验和与纤维细胞激活相关的蛋白质免疫印迹来评估EVs对纤维细胞行为的影响。

结果

AnxA2敲低降低了LM2细胞的促转移特性。来自AnxA2缺陷细胞的EVs中参与细胞骨架调节、粘附和囊泡转运的蛋白质含量减少，而与免疫相关的蛋白质含量增加。通路分析表明其迁移能力和囊泡转运信号通路受到抑制。用PKH26标记的来自AnxA2表达细胞的EVs在共聚焦成像中显示出更高的被肺纤维细胞内化率。功能上，富含AnxA2的EVs介导的相互作用增强了纤维细胞的迁移、增殖和激活标志物的表达，这与预测的蛋白质组变化一致。

结论

AnxA2被证实是调节TNBC来源EVs蛋白质组成的因子，能够增强EVs与肺纤维细胞的相互作用，并调节纤维细胞的迁移和激活，从而将肿瘤细胞蛋白质表达与肺微环境中的基质重塑联系起来。这项工作建立了一个框架，提示了一种由EV货物驱动的机制，通过该机制，来自AnxA2表达细胞的EVs可能影响TNBC的肺特异性转移过程，强调了评估EV介导的通信在癌症进展中的重要性。

背景

三阴性乳腺癌（TNBC）是一种侵袭性较强的乳腺癌亚型，治疗选择有限，并且具有强烈的向肺部转移的趋势。肿瘤来源的细胞外囊泡（EVs）在转移前微环境中是基质重编程的关键介质。 Annexin A2（AnxA2）在TNBC中过度表达，与信号转导、细胞骨架重塑和不良预后相关，但其在塑造EV货物组成及由此产生的基质行为中的作用仍不清楚。

方法

使用差异超离心法从MDA-MB-4175（LM2）TNBC细胞（具有稳定的AnxA2敲低机制）和对照细胞的 conditioned media 中分离出EVs。通过纳米粒子追踪分析、Western blotting和冷冻电子显微镜对EVs进行了表征和验证。利用定量蛋白质组学技术对EV蛋白组进行了分析，并进行了生物信息学处理。通过功能富集和通路分析来识别因AnxA2缺失而改变的蛋白质特征。通过共聚焦成像评估了EVs被受体肺纤维细胞（MRC-5和WI-38细胞）内化的情况，并通过迁移实验和与纤维细胞激活相关的蛋白质免疫印迹来评估EVs对纤维细胞行为的影响。

结果

AnxA2敲低降低了LM2细胞的促转移特性。来自AnxA2缺陷细胞的EVs中参与细胞骨架调节、粘附和囊泡转运的蛋白质含量减少，而与免疫相关的蛋白质含量增加。通路分析表明其迁移能力和囊泡转运信号通路受到抑制。用PKH26标记的来自AnxA2表达细胞的EVs在共聚焦成像中显示出更高的被肺纤维细胞内化率。功能上，富含AnxA2的EVs介导的相互作用增强了纤维细胞的迁移、增殖和激活标志物的表达，这与预测的蛋白质组变化一致。

结论

AnxA2被证实是调节TNBC来源EVs蛋白质组成的因子，能够增强EVs与肺纤维细胞的相互作用，并调节纤维细胞的迁移和激活，从而将肿瘤细胞蛋白质表达与肺微环境中的基质重塑联系起来。这项工作建立了一个框架，提示了一种由EV货物驱动的机制，通过该机制，来自AnxA2表达细胞的EVs可能影响TNBC的肺特异性转移过程，强调了评估EV介导的通信在癌症进展中的重要性。