探索超稀释的Crotalus horridus对登革病毒致病过程中抗体依赖性增强机制的潜在治疗效果

登革热病毒抗体依赖性增强（ADE）介导的病理机制研究中，超稀释眼镜蛇蛇毒在体外显示显著治疗效果，通过抑制炎症因子（如TNF-α、IL-6）、降低一氧化氮水平及NS1抗原表达，同时增强TLR信号通路，提示其作为潜在治疗药物的可行性。

　　

Tanusree Ghorai | Avipsha Sarkar | Anirban Roy | Debadatta Nayak | Satadal Das

印度西孟加拉邦加尔各答DAC区域研究所病毒学实验室

摘要

登革热病毒（DENV）仍然是一个全球性的健康问题，其中抗体依赖性增强（ADE）在疾病严重化过程中起着重要作用。ADE会导致细胞因子过度释放、一氧化氮过量产生以及非结构蛋白1抗原水平升高，从而加剧血管功能障碍、血小板减少和出血症状。本研究利用体外实验系统，探讨了超稀释的Crotalus horridus对ADE介导的DENV感染的治疗效果。通过MTT实验、菌落形成观察、细胞病变效应检测、ELISA和qRT-PCR等方法评估了其细胞毒性、病毒致病性和免疫调节作用。结果表明，在较低浓度下，超稀释的Crotalus horridus没有表现出细胞毒性，并且能够维持细胞活力。治疗处理改变了在ADE条件下感染DENV的HepG2细胞中的促炎和抗炎介质的表达。

此外，一氧化氮水平和非结构蛋白1抗原的分泌显著下降，表明病毒复制及其相关的免疫调节作用得到了抑制。研究还发现，在DENV感染过程中，TLRs的表达显著下调。经过超稀释Crotalus horridus处理后，TLRs的表达得到增强，这可能会在DENV感染期间的免疫反应中起到加剧作用。总之，这些发现表明超稀释的Crotalus horridus可能作为一种潜在的治疗药物，用于缓解ADE介导的感染带来的严重后果。

章节摘要

引言

在过去的十年中，由伊蚊传播的登革热病毒（DENV）已成为对公众健康的重大威胁。抗体依赖性增强（ADE）是导致DENV病情加重的主要因素之一，甚至可能加重已接种疫苗个体的病情。目前已有两种获批准的疫苗正在研发中，这突显了深入了解ADE相关免疫调节机制的重要性。

化学试剂

所有化学品、试剂盒和试剂均从Sigma-Aldrich（美国密苏里州圣路易斯）、Thermo Fisher Scientific（美国）和Biorad（美国加利福尼亚州）购买，除非另有说明。病毒RNA试剂盒及Dengue RG定量试剂盒（编号9111024）来自Geno-Sen公司。超稀释的Crotalus horridus和酒精的制备液均购自Hahnemann公司。

病毒和抗体滴度的测定

DENV-2毒株经过三次传代以增强其毒力，第四次传代后观察到病毒载量有所下降。终点稀释法测得DENV-2的病毒滴度为1.0 × 10⁷ TCID₅₀/ml。在本研究的所有后续实验中，使用的病毒工作稀释度为100 TCID₅₀/ml。DENV-1抗体在1:50的稀释度下并未抑制病毒侵入宿主细胞的能力。

讨论

ADE是DENV感染中的关键免疫病理现象，被认为是导致DENV疾病严重化的主要风险因素。非中和或亚中和抗体可能会促进病毒进入含有Fc受体的宿主细胞，从而加重疾病症状。尽管已有大量文献描述了DENV的致病机制，但感染的发展过程及其具体表现仍不完全清楚。

结论

本研究表明，超稀释的Crotalus horridus在特定的体外条件下对ADE诱导的免疫病理变化具有治疗潜力。研究发现，该药物能够显著降低细胞因子、NO合成酶和信号传导介质的过度表达（这些物质在ADE过程中通常会升高）。此外，抑制NS1抗原和NO的产生表明该药物可能具有抑制病毒复制的作用。

未引用的参考文献

(Alayli和Scholle, 2016; 美国疾病控制与预防中心, 2021; Majd和Jessica, 2025; REED和MUENCH, 1998)

资助

本研究由印度卫生与家庭福利部（AYUSH）的CCRH研究基金资助（文件编号17–152/2010-11/CCRH/Tech./Virology Lab 3347，批准编号300/2020-21）。

作者贡献声明

Tanusree Ghorai：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、数据分析。 Anirban Roy：撰写 – 审稿与编辑、验证、概念构思。 Avipsha Sarkar：撰写 – 审稿与编辑、初稿撰写、数据分析、概念构思。 Satadal Das：项目监督、项目管理、概念构思。 Debadatta Nayak：项目管理、资金筹措。

利益冲突声明

作者声明他们不存在任何可能影响本研究结果的财务或其他利益冲突。

致谢

作者感谢CCRH地区顺势疗法研究所（隶属于印度卫生与家庭福利部）的负责人Arti Soren博士、Director General Subhash Kaushik博士的贡献，以及来自CCRH的新德里方面的财政支持。

作者协议声明

我们声明本手稿为原创作品，未曾发表过，目前也未被其他机构考虑出版。