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本研究首次采用双向两样本孟德尔随机化（MR）框架，结合多变量MR（MVMR）分析与体外实验，系统探讨了糖化血红蛋白（HbA1c）与口腔癌之间的因果关联及免疫细胞在其中的介导作用。遗传学分析显示，HbA1c升高对口腔癌风险具有保护性效应（OR = 0.9993，P = 0.0021），且该效应部分通过活化B细胞与T细胞等免疫表型介导；体外实验进一步表明，晚期糖基化终末产物（AGEs）虽不直接影响口腔鳞癌细胞（OSCC）活力，但会通过诱导氧化应激抑制CD8+T细胞功能（降低IFN-γ与GZMB表达），并削弱其对肿瘤细胞的杀伤能力。研究揭示了血糖控制-免疫调节-口腔癌发生之间的新型机制联系，为代谢相关癌症的防控提供了新靶点。
引言
头颈部癌是全球第六大常见癌症，其中口腔癌是其主要亚型，病因涉及烟草、酒精、遗传易感性等多因素。尽管治疗手段不断进步，但其生存率近几十年仅略有提升，亟需探索新的生物标志物与治疗靶点。糖化血红蛋白（HbA1c）作为反映长期血糖水平的稳定指标，已被证实与血管及代谢疾病风险相关，但其与口腔癌的因果关联及机制尚不明确。本研究采用孟德尔随机化（MR）方法，通过遗传工具变量推断因果关系，并重点探讨免疫细胞在HbA1c与口腔癌关系中的潜在介导作用。
材料与方法
研究采用双向两样本MR设计，利用全基因组关联研究（GWAS）数据：HbA1c（n=46,368）、口腔癌（357例/372,016对照）及731种免疫细胞特征。工具变量筛选标准为P < 1×10–5，并排除连锁不平衡（r2< 0.1，距离 > 500 kb）。主要采用逆方差加权（IVW）法进行因果估计，辅以MR-Egger、加权中位数等方法进行敏感性分析。多变量MR（MVMR）用于评估免疫细胞在HbA1c与口腔癌关系中的介导效应。体外实验部分，以晚期糖基化终末产物（AGEs）处理口腔鳞癌细胞（Cal-27与SAS）及CD8+T细胞，通过CCK-8检测细胞活力、流式细胞术分析IFN-γ与GZMB表达、LDH释放实验评估细胞毒性，并检测活性氧（ROS）水平。
结果
- 1.
HbA1c对口腔癌的因果效应：IVW分析显示，遗传预测的HbA1c升高与口腔癌风险呈显著负相关（OR = 0.9993，95% CI: 0.9988–0.9997，P = 0.0021）。散点图与漏斗图显示结果一致性高，无明显偏倚。
- 2.
敏感性分析与反向MR：异质性检验（Cochran’s Q = 1497.83，P = 0.018）与多效性检验（MR-Egger截距P = 0.620）均支持结果稳健性。留一法分析未发现单一SNP对结果有过度影响。反向MR分析显示口腔癌对HbA1c水平无因果效应（OR = 0.1591，P = 0.1732），排除了反向因果可能。
- 3.
多变量MR与免疫细胞介导分析：MVMR分析识别出8组与HbA1c显著相关的免疫细胞类型（P < 0.05），其中模型2、6、7与口腔癌风险显著相关，提示免疫细胞可能介导HbA1c对口腔癌的影响。Steiger方向性检验均确认为正向因果。
- 4.
体外实验结果：
- •
细胞活力：不同浓度（50、100、200 μg/mL）的AGEs处理12–60小时，对Cal-27与SAS细胞活力均无显著影响。
- •
CD8+T细胞功能：AGEs处理显著降低了CD8+T细胞中IFN-γ与GZMB的表达比例（P < 0.05）。
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细胞毒性：AGEs预处理的口腔癌细胞在效应细胞共培养后，其特异性裂解率（% Lysis）在E:T比为5:1、10:1、20:1时均显著降低（P < 0.0001）。
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氧化应激：AGEs处理显著提高了CD8+T细胞内ROS水平（P < 0.01），提示氧化应激可能是其功能受损的关键机制。
讨论
本研究通过MR首次提供了HbA1c与口腔癌之间存在保护性因果关联的遗传学证据，并揭示了免疫细胞（尤其是活化B细胞与T细胞）在这一关系中的潜在介导作用。体外实验进一步阐明，AGEs虽不直接杀伤肿瘤细胞，但可通过诱导氧化应激显著削弱CD8+T细胞的效应功能与细胞毒性，从而在肿瘤微环境中营造免疫抑制状态。这一发现将血糖代谢（以HbA1c为代表）、晚期糖基化终末产物（AGEs）蓄积、氧化应激、CD8+T细胞功能抑制与口腔癌风险串联起来，构成了一个“糖代谢-免疫调节-癌变”的轴心机制。研究同时指出，反向MR未发现口腔癌对HbA1c的因果影响，强调了HbA1c作为独立风险因素的地位。这些结果提示，在糖尿病或高血糖个体中，长期血糖控制可能通过调节免疫细胞功能影响口腔癌易感性，为代谢相关癌症的免疫干预提供了新思路。
局限性与结论
研究的局限性包括口腔癌病例数相对有限、缺乏临床分层数据以及遗传工具变量在不同人群中的普适性未完全验证。尽管如此，本研究整合遗传学推断与功能实验，系统论证了HbA1c可能通过免疫细胞介导对口腔癌产生保护作用，并首次揭示AGEs通过氧化应激损害CD8+T细胞功能的分子机制。这些发现不仅深化了对血糖-免疫-癌症轴的理解，也为未来开发针对糖代谢与免疫交叉靶点的口腔癌预防与治疗策略提供了重要依据。
