在含有顺式编程自消除组分的转基因构建体中，不同大肠杆菌菌株中观察到了类似SSA和MMEJ的重组事件

研究旨在建立一种在果蝇中自消除并保留所需载体的转基因系统。通过在E. coli中构建多组分质粒，发现同源重组事件导致DNA片段精准删除，并揭示Aedes aegypti调控元件在E. coli中的泄漏现象。

　　

摘要

目的

DNA修复途径已被用于遗传工程策略，包括在昆虫中实现自消除转基因。为了建立一种能够在埃及伊蚊（Aedes aegypti）中保留所需物质（如抗体或抗病毒分子）的自消除转基因系统，我们着手制备了一种含有直接重复序列及其他必要转基因组分的质粒。本文介绍了在构建用于埃及伊蚊的自消除转基因系统时，在大肠杆菌（E. coli）中发生的一系列重组事件。

结果

在Stellar?大肠杆菌感受态细胞中逐步构建这种多组分质粒，成功地对先前研究中的原始质粒进行了改造：去除了部分DNA片段，并在目标位置插入了直接重复序列以及荧光标记基因盒（3xP3-DsRed和3xP3-BFP）。然而，在将位于质粒内部的I-SceI同源内切酶的靶序列引入质粒后，观察到了能够精确且可重复地删除小片段和大片段DNA的重组事件。使用其他大肠杆菌菌株（如SURE和NEB? Stable感受态细胞）也观察到了类似的重组现象，尽管最终只有一个NEB? Stable细胞的克隆获得了预期的质粒结构。对错误质粒的分析表明，SSA类和MMEJ类DNA修复途径可能是导致这些重组事件的原因，这提示用于调控I-SceI同源内切酶的埃及伊蚊调控元件可能在大肠杆菌中存在功能缺陷。