循环中高水平的miR-19a-3p与转移性HER2阳性乳腺癌患者的良好预后和抗肿瘤免疫反应相关

《Breast Cancer Research》：High levels of circulating miR-19a-3p in patients with metastatic HER2?+?breast cancer are associated with a favorable prognosis and anti-tumor immune responses

这篇研究性文章深入探讨了循环miRNA作为乳腺癌免疫治疗生物标志物的潜力。研究发现，在接受曲妥珠单抗治疗的转移性HER2阳性乳腺癌患者中，血清中高水平的miR-19a-3p与良好的预后相关。其背后机制涉及有效的自然杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞毒性以及活化的CD4+辅助T细胞1型细胞，这些细胞能表达并分泌更高水平的该miRNA，共同构成了与良好预后相关的抗肿瘤免疫反应。这项研究为理解曲妥珠单抗疗效的免疫学机制和寻找预测性血液生物标志物提供了新见解。

　　

背景

曲妥珠单抗联合化疗是当前治疗转移性和早期HER2阳性乳腺癌的标准疗法。其作用机制之一是抗体依赖性细胞毒性，即通过与自然杀伤细胞表面的FcγRIIIA (CD16)结合，激活NK细胞杀伤肿瘤。一个功能健全的免疫系统和正常运作的NK细胞对于有效的ADCC至关重要。然而，患者通常在治疗约一年后产生耐药性。该研究团队此前报道，在接受曲妥珠单抗治疗的转移性HER2阳性乳腺癌患者中，血清miR-19a-3p水平升高与良好预后相关。本研究旨在揭示导致血清miR-19a-3p水平升高的机制及相关的免疫细胞。

方法

研究使用来自健康个体的外周血单个核细胞分离初始CD4⁺T细胞和NK细胞。初始CD4⁺T细胞被极化为CD4⁺Th1和CD4⁺Th2细胞。NK细胞被用于ADCC实验。使用RT-qPCR测量转录因子、细胞因子及miR-19a-3p的水平。通过流式细胞术分析表面标志物和细胞因子以表征免疫细胞表型。

结果

1. 1.
   HER2阳性乳腺癌细胞高表达miR-19a-3p：分析显示，在乳腺癌组织中，miR-19a-3p在三阴性乳腺癌和HER2阳性亚型中表达最高。
   体外实验也证实，与ER阳性细胞系MCF-7相比，两种HER2阳性细胞系SKBR3和KPL-4的细胞及其培养上清液中均含有更高水平的miR-19a-3p。
2. 2.
   NK细胞介导的ADCC增加了miR-19a-3p的释放：曲妥珠单抗与肿瘤细胞结合可有效诱导NK细胞介导的ADCC，导致肿瘤细胞凋亡或死亡。伴随此过程，细胞上清液中检测到miR-19a-3p的水平显著增加，且该释放量与肿瘤细胞内的miR-19a-3p基础水平成正比。
3. 3.
   Th1细胞比Th2细胞表达和分泌更多的miR-19a-3p：经抗CD3/CD28激活后，极化的CD4⁺Th1细胞表达和分泌的miR-19a-3p水平显著高于CD4⁺Th2细胞。在长期培养中，再次刺激能持续维持Th1细胞中较高的miR-19a-3p水平。此外，CD4⁺Th1细胞在培养后期形成了中央记忆T细胞表型。
4. 4.
   miR-19a-3p水平与患者免疫状态相关：在一项对15名患者的小型回顾性研究中发现，与血清miR-19a-3p水平低、预后差的患者相比，血清miR-19a-3p水平高、预后良好的转移性HER2阳性乳腺癌患者，其外周血中活化的T细胞和NK细胞比例更高。虽然CD4⁺IFN-γ⁺与CD4⁺IL-4⁺T细胞的比值有更高的趋势，但统计学差异不显著 (p = 0.0813)。
   CM) cell phenotype of CD4+ Th1 cells and immune cell populations in the peripheral blood of patients with metastatic HER2+ breast cancer. a-b) CD4+ Th1 cells expressing high levels of miR-19a-3p developed a central memory T (TCM) cell phenotype (CD45RO+CCR7+CD62L+) by the end of the cell culture; c-e) in a small cohort of patients with metastatic HER2+ breast cancer, those with a good prognosis and high serum levels of miR-19a-3p showed a trend of higher percentage of CD4+ Th1 than CD4+ Th2 cells, and higher percentage of activated CD4+ T and NK cells circulating in their blood.">

讨论

研究结果表明，转移性HER2阳性乳腺癌患者血清中升高的miR-19a-3p可能源于两个关键事件：NK细胞介导的有效ADCC导致富含miR-19a-3p的肿瘤细胞内容物释放，以及具有抗肿瘤功能的CD4⁺Th1细胞的活化与分泌。CD4⁺Th1细胞分泌的干扰素-γ和白介素-2对于激活CD8⁺细胞毒性T淋巴细胞和NK细胞至关重要。因此，血清miR-19a-3p水平的升高可被视为一种与有效抗肿瘤免疫反应相关的“免疫活性信号”。

该研究也存在局限性，例如患者队列规模较小，且为回顾性研究。未来的研究需要在前瞻性、大规模队列中验证这些发现，并进一步探索其他免疫细胞（如巨噬细胞）对miR-19a-3p水平的贡献。此外，研究还观察到曲妥珠单抗也能诱导非HER2过表达的MCF-7细胞发生ADCC，这为未来探索miR-19a-3p作为非HER2过表达乳腺癌患者从曲妥珠单抗治疗中获益的生物标志物提供了初步线索。

综上，血液中miR-19a-3p的水平可能有助于识别那些因曲妥珠单抗治疗而引发了有效抗肿瘤免疫反应的乳腺癌患者，为个体化治疗和预后评估提供了新的潜在工具。