高亲和力的重组抗体使得能够使用敏感的MRGPRX2特异性ELISA方法来检测过敏性鼻炎和慢性自发性荨麻疹

《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》：High-affinity recombinant antibodies enable a sensitive MRGPRX2-specific ELISA for detecting allergic rhinitis and chronic spontaneous urticaria

MRGPRX2检测新型夹心ELISA平台构建及其在过敏性疾病中的诊断价值

摘要

与肥大细胞相关的G蛋白偶联受体X2（MRGPRX2）在肥大细胞激活和伪过敏反应的介导中起着关键作用，其在外周血中的检测对于研究肥大细胞相关疾病（如过敏性鼻炎（AR）、慢性自发性荨麻疹（CSU）和哮喘）非常重要。然而，基于多克隆抗体和杂交瘤衍生单克隆抗体的现有检测方法在准确性、重现性和标准化方面存在局限性，这突显了需要替代抗体策略的必要性。在本研究中，使用IEDB分析资源合理选择的MRGPRX2肽段对动物进行了免疫，并生成了序列定义的重组单克隆抗体。随后建立并使用过敏性鼻炎、慢性自发性荨麻疹患者以及健康对照组的血清样本（中国临床试验注册号：ChiCTR2400082024、ChiCTR2400094130）验证了这种夹心ELISA方法。研究发现，包含残基289-330的肽段是最佳免疫原，共获得了六种重组抗体，其中最佳的捕获-检测对通过表面等离子体共振和Western blot分析证实具有高亲和力。所开发的ELISA在1.5625–200 ng/mL的浓度范围内表现出优异的线性（y = 82.772x ? 9.6566，R2 = 0.9996），回收率令人满意（83.82–115.60%），不精确度低（批内CV = 3.9%，批间CV = 5.8%），检测限为0.981 ng/mL。此外，该检测方法还具有良好的稳定性和特异性。与健康对照组相比，过敏性鼻炎和慢性自发性荨麻疹患者的血清MRGPRX2水平显著升高。总体而言，这些结果表明基于重组抗体的ELISA为循环MRGPRX2的检测提供了一个敏感、特异、稳定且可重复的平台，在肥大细胞相关疾病的临床和转化应用中具有巨大潜力。

图形摘要