《Reproductive Toxicology》：Differential Disruption of Gonadal Development by DEHP and Paracetamol in Male and Female Wistar Rats
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研究孕期对乙酰氨基酚和邻苯二甲酸二异辛酯（DEHP）对大鼠生殖系统发育的影响，发现DEHP降低雄性胎仔的阴茎生殖器距离，抑制睾酮合成，并上调ECS相关基因Cnr2和Napepld表达；对乙酰氨基酚高剂量暴露则导致雌性胎仔卵巢原始和过渡期卵泡数量减少，促进卵泡闭锁。提示卵巢对对乙酰氨基酚更敏感，而DEHP可能通过ECS介导毒性作用。
安德森·塔德乌·德·阿劳霍-拉莫斯（Anderson Tadeu de Araújo-Ramos）、塔蒂亚娜·扎乌尔·库里（Tatiana Zauer Curi）、安娜·贝亚特丽兹·阿布雷乌·费拉兹·辛斯卡斯（Anna Beatriz Abreu Ferraz Scinskas）、拉蒙·特林达德·乌尔巴诺（Ramon Trindade Urbano）、珍妮·玛丽亚·德·奥利维拉（Jeane Maria de Oliveira）、凯瑟琳·玛丽亚·斯佩尔科斯基（Katherinne Maria Spercoski）、保拉·克里斯沃尔·门东萨·戈麦斯（Paula Criswall Mendon?a Gomes）、马塞洛·皮西宁·贝尔努奇（Marcelo Picinin Bernuci）、雷娜塔·马里诺·罗曼诺（Renata Marino Romano）、安德森·乔埃尔·马蒂诺-安德拉德（Anderson Joel Martino-Andrade）
巴西巴拉那联邦大学生理学系动物内分泌与生殖生理学实验室，库里蒂巴
摘要
对乙酰氨基酚（Paracetamol）和邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）属于内分泌干扰物（Endocrine Disrupting Chemicals, EDCs），已知会损害实验模型中的胎儿性腺发育并抑制睾酮合成。我们假设这些物质可能与内源性大麻素系统（Endocannabinoid System, ECS）相互作用，从而导致睾丸和卵巢发育异常。妊娠期Wistar大鼠从妊娠第15天到第18天被暴露于对乙酰氨基酚（剂量为50或250 mg·kg?1·day?1）或DEHP（剂量为750 mg·kg?1·day?1）。我们评估了胎儿睾丸的睾酮生成情况、出生后早期的卵巢卵泡数量，以及参与类固醇生成、睾丸下降、卵巢发育以及ECS信号传导、合成和降解的相关基因表达。在体外实验中，未暴露于这些物质的胎儿睾丸与对乙酰氨基酚或其代谢物AM404共同孵育三小时，同时加入或不加入CB1拮抗剂利莫那班（rimonabant）。另一组大鼠则暴露于DEHP的主要代谢物MEHP。在体内实验中，DEHP降低了雄性动物的生殖器长度和睾丸睾酮水平，增加了两种性腺中的Cnr2基因表达，并上调了胎儿睾丸中的Napepld基因表达；MEHP在体外实验中增加了睾酮分泌。在卵巢中，高剂量的对乙酰氨基酚减少了健康原始卵泡和过渡期卵泡的数量，并增加了初级和次级卵泡的闭锁现象。这些发现表明卵巢对对乙酰氨基酚的敏感性高于睾丸。与对乙酰氨基酚不同，DEHP改变了关键ECS基因的表达，提示邻苯二甲酸酯可能与ECS之间存在相互作用。这提示ECS成分可能参与邻苯二甲酸酯的毒性机制，并可能成为潜在的生物标志物，值得进一步研究。
章节摘录
引言
“发育起源与健康疾病”（Developmental Origins of Health and Diseases, DOHaD）理论认为，在发育的关键时期接触环境因素可能损害发育中的生物体并导致多种成年期疾病[1]。与生育能力相关的DOHaD效应包括睾丸发育不良综合征（Testicular Dysgenesis Syndrome, TDS）和卵巢发育不良综合征（Ovarian Dysgenesis Syndrome, ODS），尽管后者的研究仍存在争议[2][3]。其中一个重要的致病因素可能是环境暴露。
动物
实验所用雄性和雌性Wistar大鼠（60日龄）来自巴西巴拉那联邦大学的动物设施。实验方案已获得当地动物使用伦理委员会（CEUA）的批准（注册编号：1419）。实验前这些大鼠进行了为期一个月的适应期，实验开始时它们大约90日龄。整个实验期间，大鼠处于12小时光照/黑暗周期环境中（光照时间为每天10:00）。
实验一：母体数据
雌性大鼠从妊娠第15天到第18天处于暴露状态。一组大鼠（包括母体和胎儿）在妊娠第18天被检测，另一组则自然分娩，母体和后代在出生后第7天（PND7）被评估。妊娠第18天或出生后第7天检测的母体体重、器官重量及妊娠数据分别见补充表S2和S3。除绝对器官重量略有下降外，未发现体重或器官相对重量的显著变化。
讨论
本研究首次探讨了对乙酰氨基酚和DEHP与大鼠发育中性腺之间可能的相互作用。我们发现，睾丸和卵巢中的Cnr2基因表达对妊娠期DEHP暴露敏感；此外，Napepld基因也是DEHP在胎儿睾丸中的毒性靶点。结果还表明，对乙酰氨基酚和DEHP在Wistar大鼠中表现出不同的生殖毒性特征。对乙酰氨基酚暴露并未影响睾酮合成或生殖器长度（AGD）。
结论
总之，妊娠期间暴露于DEHP会改变性腺中内源性大麻素系统（ECS）成分的表达，尤其是Cnr2基因，这可能成为胎儿邻苯二甲酸酯毒性的新基因组生物标志物。此外，对乙酰氨基酚暴露会对卵巢组织产生负面影响，减少健康原始卵泡和过渡期卵泡的数量，同时增加初级和次级卵泡的闭锁现象（尤其是在250 mg·kg?1·day?1的暴露剂量下）。这些发现表明卵巢对对乙酰氨基酚的敏感性更高。
未引用参考文献
[69], [70], [71], [72], [73], [74], [75], [76]
资金支持
本研究未获得公共、商业或非营利机构的任何特定资助。
作者贡献声明
拉蒙·特林达德·乌尔巴诺（Ramon Trindade Urbano）： 方法学研究
塔蒂亚娜·扎乌尔·库里（Tatiana Zauer Curi）： 方法学研究
安娜·贝亚特丽兹·阿布雷乌·费拉兹·辛斯卡斯（Anna Beatriz Abreu Ferraz Scinskas）： 方法学研究
安德森·马蒂诺-安德拉德（Anderson Joel Martino-Andrade）： 文章撰写、审稿与编辑、监督、数据分析、概念构思
安德森·塔德乌·德·阿劳霍-拉莫斯（Anderson Tadeu de Araújo-Ramos）： 文章撰写、审稿与编辑、初稿撰写、数据可视化、方法学研究、数据管理
雷娜塔·马里诺·罗曼诺（Renata Marino Romano）： 方法学研究、数据分析、概念构思
保拉·克里斯沃尔·门东萨·戈麦斯（Paula Criswall Mendon?a Gomes）： 方法学研究
利益冲突声明
作者声明不存在可能影响本文研究的已知财务利益或个人关系。
致谢
安德森·塔德乌·德·阿劳霍-拉莫斯（Anderson Tadeu de Araújo-Ramos）获得了巴西高等人员培训协调委员会（CAPES）的博士奖学金；安德森·乔埃尔·马蒂诺-安德拉德（Anderson Joel Martino-Andrade）获得了巴西国家科学技术发展委员会（CNPq）的奖学金。
利益冲突声明
作者声明不存在任何可能影响本文研究的利益冲突。
