TCEP介导的蛋白质水解：高效选择性地切割蛋白质C端至天冬氨酸位点

《RAPID COMMUNICATIONS IN MASS SPECTROMETRY》：TCEP-Mediated Protein Hydrolysis: Highly Selective Cleavage C-Terminal to Aspartic Acid

TCEP作为常用还原剂，在无二硫键蛋白质中特异性水解天冬氨酸羧基末端，该机制独立于二硫键还原，质谱分析中需警惕其潜在水解作用。

摘要

背景

三(2-羧基乙基)膦（TCEP）是一种常用的实验室试剂，用于还原二硫键。由于其强氧化还原潜力、在广泛pH范围内的有效性以及使用上的便利性，TCEP通常比其他还原试剂（如二硫苏糖醇（DTT）更受欢迎。然而，许多涉及TCEP的副反应尚未得到充分分类和理解。

研究发现

通过结合凝胶电泳和质谱技术，我们发现TCEP参与蛋白质水解的独特机制。这种行为仅发生在天冬氨酸残基的羧基末端。

结论

由于在缺乏二硫键甚至完全缺乏半胱氨酸的蛋白质中也观察到了这种现象，因此这种水解作用与蛋白质中二硫键的还原过程完全无关。尽管这种水解的具体化学机制尚不清楚，但这一发现作为质谱分析的样品制备工具具有广泛的应用前景。同时，这也提醒我们在使用这种常见实验室试剂时需谨慎，因为它可能导致所研究蛋白质发生不必要的水解。

影响

这一发现的更广泛分析意义在于，许多先前未知的实验结果现在可以准确地归因于特定原因，特别是在蛋白质组学样品制备、氧化还原化学研究等领域。此外，这也扩展了我们对TCEP化学性质的认识，使其不仅仅局限于作为二硫键还原剂的功能，为肽图谱分析提供了方法上的可能性，并对生化样品处理提出了重要的警示。

利益冲突

作者声明以下利益冲突：所有作者在研究期间均为默克雪兰诺公司（Merck Sharp & Dohme LLC）的雇员，该公司是默克公司（Merck & Co., Inc.）的子公司，位于美国新泽西州拉韦（Rahway, NJ）。所有研究资金均由默克雪兰诺公司提供。

数据可用性声明

支持本研究结果的数据可应合理要求向通讯作者索取。