Vδ2 T细胞细胞毒性极化改变与不明原因复发性流产中的血管功能障碍相关：一项初步研究

《Journal of Reproductive Immunology》：Vδ2 T-cell Cytotoxic Polarity Shift is Associated with Vascular Dysfunction in Unexplained Recurrent Miscarriage: A Preliminary Study

本研究探讨未知的复发性流产（URM）患者外周血Vδ2 γδT细胞毒性表型与血管损伤的关联。纳入30例URM患者及30例健康对照，通过流式细胞术分析Vδ2亚群及perforin、Granzyme B表达，检测血清sFlt-1、vWF等血管损伤标志物。结果显示URM患者Vδ2细胞中GB?PF?比例显著升高，且与sFlt-1、vWF水平正相关，提示细胞毒性极化可能介导血管损伤，为URM治疗提供新靶点。

　　

Xiao-xia He|Hong-xing Li|Yi Jin|Xi Xi|Xiao-ling Ma|Ya-Ming Xi

兰州大学第一临床医学院，中国兰州730000

摘要

目的

本研究旨在探讨外周血Vδ2 γδT细胞的细胞毒性特征与不明原因复发性流产（URM）中血管损伤之间的关联

方法

共纳入30例URM患者和30例年龄匹配的健康对照组。通过流式细胞术分析γδT细胞和Vδ2亚群及其穿孔素和颗粒酶B的表达情况。使用ELISA检测血清中的血管损伤标志物（sFlt-1、sEng、vWF、LDH、VCAM-1）水平。

结果

尽管γδT细胞的总比例和IL-22表达水平没有显著差异，但URM患者中的Vδ2亚群表现出明显的细胞毒性极化：颗粒酶B?穿孔素?（GB?PF?）Vδ2细胞的频率显著升高，而总γδT细胞和Vδ2细胞中的GB?PF?细胞显著减少。相应地，URM组的sFlt-1和vWF水平显著升高，sEng水平呈下降趋势。LDH和VCAM-1在两组间无差异。重要的是，相关性分析显示了不同的免疫-血管关联模式：sFlt-1水平与GB?PF? CD3?和GB?PF? γδT细胞的比例呈正相关，而vWF水平与GB?PF? γδT细胞呈负相关，但与GB?PF? Vδ2细胞呈正相关。

结论

本研究提供了URM中Vδ2细胞细胞毒性极化的初步证据，这似乎与血管损伤标志物有关。这些发现揭示了表达穿孔素的Vδ2细胞与URM发病机制之间的潜在关联，突出了新的免疫-血管相互作用，并为未来的研究和治疗策略提供了假设生成的见解。

引言

不明原因复发性流产（URM）影响了1-5%的育龄妇女。虽然已知的致病因素包括解剖异常、内分泌紊乱和血栓形成倾向，但大约50%的URM病例的病因仍不清楚（Yao等人，2024年）。近年来，母胎界面免疫微环境的失调已被证实与URM的发病机制有关；然而，具体的效应细胞和分子机制尚未阐明（Nakashima等人，2021年）。

除了关注免疫失调外，血管功能障碍也是复发性流产（RM）的另一个明确的病理特征，通常表现为胎盘灌注受损和血管生成失衡（Lian等人，2024年；Girardi等人，2006年）。为了全面了解这一多方面的病理情况，我们选择了与妊娠期间凝血、免疫和炎症相关路径相互交叉的血清生物标志物，包括vWF（内皮激活/促血栓形成）、sFlt-1（抗血管生成）、sEng（血管功能障碍）、VCAM-1（内皮炎症）和LDH（细胞损伤）（Lian等人，2024年；Girardi等人，2006年；Robertson等人，2018年；Pang等人，2013年；Rana等人，2022年；Kawecki等人，2017年；Levine等人，2006年；Dave等人，2016年；Zhou等人，2019年）。这种综合方法有助于全面评估血管系统。

作为先天免疫的关键调节器，γδ T细胞在妊娠期间对母体免疫耐受具有双重作用（Zhang和Yang，2022年；Huang和Guo，2022年；Gorczynski等人，2002年；Barakonyi等人，2002年；Clark等人，2001年；Clark和Croitoru，2001年；Pinget等人，2016年；Chang等人，2019年）。先前的研究表明，外周和局部γδ T细胞的过度激活和促炎潜力可能是RM的致病机制（Yu等人，2021年）。此外，一些研究提出URM患者中Vδ2 γδ T细胞的富集可能具有潜在的细胞毒性，这可能通过直接杀伤作用破坏胎盘稳态（Guo等人，2023年）。因此，这种特定亚群的异常活动可能针对胎盘血管，成为免疫介导的血管损伤的潜在机制。虽然一些报告表明γδ T细胞参与胎盘血管重塑（Polese等人，2018年），但其他研究未发现其血管侵袭/细胞毒性与流产风险之间的关联（Terzieva和Alexandrova，2024年），这表明其功能状态而非单纯的存在至关重要。

因此，一个有趣但尚未充分探索的假设是，一种特定的、功能极化的细胞毒性Vδ2 γδ T细胞群体可能成为母体免疫失调与URM中观察到的血管内皮损伤之间的直接联系。由于缺乏有效的URM治疗方案，抗凝剂常被用作临床预防措施。然而，由于缺乏支持性的理论依据，抗凝剂的使用效果仍存在很大争议（Parveen等人，2025年；Awolumate等人，2020年）。

基于这一研究背景，我们假设URM患者表现出可能与外周Vδ2 γδ T细胞的细胞毒性特征机制相关的血管内皮损伤。为了解决这一空白，本研究重点关注URM患者的外周血γδ T细胞及其Vδ2亚群。通过同时分析T细胞中穿孔素和颗粒酶B的表达以及系统性血管损伤标志物的水平，我们旨在探讨Vδ2 T细胞细胞毒性极化与血管功能障碍之间的关联，从而探索URM发病机制中潜在的新免疫-血管轴。

研究对象和分组

2025年3月至5月期间，在我们医院的生殖医学中心就诊的30例URM患者被纳入URM组。同期，招募了30名年龄匹配的育龄健康女性作为对照组（过去6个月内无怀孕计划）。

URM组的纳入标准：①符合ESHRE 2023年URM的诊断标准（Bender Atik等人，2023年），即≥2次连续不明原因的流产

研究参与者的基线特征

URM组和对照组在母亲年龄（28.97 ± 2.70岁 vs 28.83 ± 2.61岁，t=0.194，P=0.847）、体重指数（21.21 ± 2.90 kg/m2 vs 20.72 ± 2.76 kg/m2，t=0.671，P=0.505）或月经周期规律性（86.67% vs 93.33%，P=0.667）方面没有显著差异。作为定义标准，URM组有流产史（2.87 ± 0.73次），而对照组没有流产史（P < 0.001）（表1）。

γδ T细胞的比例和亚群分布

γδ T细胞的比例没有显著差异

讨论

这项初步研究揭示了URM女性外周血Vδ2 γδ T细胞中明显的细胞毒性极化，表现为穿孔素高表达（GB?PF?）细胞显著增加，同时穿孔素低表达（GB?PF?）细胞显著减少。这种功能转变与升高的系统性血管内皮损伤标志物sFlt-1和vWF相关，提示URM发病机制中存在新的免疫-血管关联。

为了更好地理解这些发现，我们考虑了γδ T细胞的复杂作用

作者贡献

Xiao-xia He：研究、方法学、数据采集和写作。Hong-xing Li：统计分析、验证和手稿起草。Yi Jin：图像处理、材料收集。Xi Xi：手稿指导、修订。Xiao-ling Ma：资源提供、验证。Ya-ming Xi：行政工作、材料支持、监督。

资助

本研究得到了甘肃省卫生健康科学研究计划（项目编号GSWS KY2021-029）和甘肃省自然科学项目（项目编号21JR11RA085、24JRRA1082）的支持。本研究不存在任何与发表内容直接或间接相关的财务或非财务利益。

作者贡献声明

Xiao-ling Ma：项目管理、概念构思。Xi Xi：软件、方法学。Xi Ya-ming：监督、项目管理、概念构思。Yi Jin：写作——审阅与编辑、概念构思。Hong-xing Li：软件、研究、正式分析。Xiao-xia He：写作——初稿撰写、验证、方法学、研究、数据管理。

利益冲突

作者声明没有利益冲突，无论是财务上的还是其他方面的。

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突，无论是财务上的还是其他方面的。