《Italian Journal of Animal Science》：Largemouth bass (Micropterus salmoides, Lacépède, 1802) infestation by Ergasilus sieboldi (Nordmann, 1832) in Southern Italy
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这篇研究在意大利南部首次报道了外来鱼类大口黑鲈（Micropterus salmoides）感染寄生桡足类西氏鳋（Ergasilus sieboldi）的病例。文章通过形态学、分子系统发育（28S rDNA）和组织病理学分析，确认了寄生虫种属，揭示了其引起鳃丝侵蚀、坏死和鳞状化生等严重损伤，并可能为气单胞菌（Aeromonas）等条件致病菌提供继发感染机会，最终导致鱼类死亡。该发现对评估入侵物种的寄生虫传播风险及水产养殖健康管理具有重要意义。
引言
西氏鳋（Ergasilus sieboldi）是属于鳋科（Ergasilidae）的一种寄生性桡足类，主要侵袭淡水及海水鱼类的鳃部，在全球范围内引发鱼类死亡事件。与鳋科其他桡足类相似，西氏鳋的成年雌性为寄生阶段，雄性在完成交配后死亡。这类寄生虫造成的机械损伤为细菌、病毒和真菌等病原体的继发感染创造了条件。大口黑鲈（Micropterus salmoides）是一种淡水鱼类，属于太阳鱼科（Centrarchidae），已被引入包括意大利在内的许多欧洲国家。鉴于此前关于大口黑鲈感染鳋属（Ergasilus sp.）的病例报道极少，本研究旨在描述在意大利南部坎帕尼亚地区孔扎湖发现的大口黑鲈个体感染西氏鳋的首个病例。
材料与方法
诊断检查
2024年5月至6月间，意大利南部坎帕尼亚地区孔扎湖发生大口黑鲈死亡事件。研究人员收集了所有死亡个体，并送至实验动物预防医学研究所进行尸检。由于腐烂程度较高，最终选取三尾个体进行检验。尸检评估了外部病变，并检查了内部器官。鳃组织被送至萨莱诺大学进行寄生虫学检查。鳃组织在体视显微镜下观察，收集的桡足类样本保存在96%乙醇中，以便根据标准方法进行形态学鉴定。同时，对肝脏、脾脏、肾脏、鳃和脑部进行细菌学调查，使用血琼脂和胰蛋白酶大豆琼脂培养，并通过API和VITEK2系统鉴定。
分子与系统发育分析
从形态相似的寄生虫样本池中提取DNA。使用针对鳋属28S rDNA基因部分片段（688 bp）的特异性引物进行终点PCR扩增。对获得的扩增子进行纯化和双向测序。序列经比对和编辑后，在GenBank数据库中进行BLAST比对。基于Ergasilidae科不同物种的28S rDNA基因序列（644 bp），采用邻接法（Neighbor-Joining）和最大复合似然法（Maximum Composite Likelihood）构建系统发育树，使用鲤锚头鳋（Lernaea cyprinacea）的序列作为外群。
组织病理学分析
三尾鱼的鳃组织用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋后切片，用苏木精和伊红染色，最后使用数字扫描仪获取图像。
结果与讨论
所有三尾受检样本（3/3）均被西氏鳋严重感染，感染强度高达每尾鱼数百只寄生虫，几乎覆盖了整个鳃表面。尸检显示，除鳃部外，内脏器官未见病变。鳃部颜色苍白，边缘不规则、有侵蚀。初级鳃丝表面散布着约1毫米长的椭圆形、微白色隆起结节，即桡足类寄生虫。
显微镜下观察到的桡足类均为成年雌性，其形态特征与已知的西氏鳋描述一致：前体部（prosome）由头胸部和4个自由抱卵节组成；后体部（urosome）亦为5节，包括第5抱卵节、具有两个纵向生殖孔的大型生殖节以及3个自由腹节。后体部各节边缘具小棘列，尾叉末端有4根长度不同的刚毛。大多数标本具有两个含多排卵的长卵囊。第一触角为6节，刚毛式为3：12：5：4：2：7。第二触角为4节，呈典型的爪状，具攫握功能，其第一内肢节上有一个短尖突，第二内肢节上有两个短尖突。游泳附肢由四对分节的双肢型腿组成，第一对腿在结构上与其他游泳腿相似，但因适应摄食功能而略有不同。
形态学鉴定得到了分子分析的证实。PCR/测序联合方法检测到西氏鳋DNA。所获得的28S rDNA基因部分序列（644 bp）与GenBank中已有的西氏鳋序列相比，覆盖度为100%，核苷酸一致性为99.5%至100%。系统发育分析显示，本研究获得的序列与来自埃及金头鲷（Sparus aurata）和捷克河鲈（Perca fluviatilis）的西氏鳋序列以98%和99%的自举值聚集在一起，表明欧洲境内这些桡足类存在密切的亲缘关系。该序列已提交至GenBank，登录号为PQ804730。
组织病理学分析显示，大量西氏鳋成年雌体附着在初级鳃丝的远端和中部，引发了广泛的病理变化，包括鳃丝上皮弥漫性增生、鳞状化生并融合，粘液分泌增加，以及鳃丝内严重的炎症浸润。寄生虫的附肢和第二触角造成了机械性组织损伤，导致侵蚀、坏死和脱屑。观察到的病变与呼吸功能受损一致，结合环境或细菌应激因素，可能导致鱼类死亡。因此，鳋类造成的组织损伤可能成为其他病原微生物（如细菌、病毒和真菌）引发继发感染的入口。在本研究中，从样本中分离出了多种广泛存在于水生环境中的机会致病菌，包括温和气单胞菌（Aeromonas sobria）、嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）、布拉克枸橼酸杆菌（Citrobacter braakii）和类志贺邻单胞菌（Plesiomonas shigelloides）。
形态学分析将鳋属与先前在意大利报道的新物种新鳋属（Neoergasilus）区分开来，因为样本不具备新鳋属的主要识别特征。遗憾的是，由于可用于比对的更长序列有限，系统发育分析仅限于28S rDNA的部分片段（644 bp）。未来整合更多遗传标记（如COI、18S rDNA）的研究将有助于提高系统发育解析度。
本研究报道了意大利首例大口黑鲈感染西氏鳋的病例。若未来此类感染变得普遍，考虑到较高的水温会促进其卵的发育并导致数量增加，这些寄生虫可能对野生和养殖鱼类种群构成重大问题，因为它们有能力引发高死亡率。
