《Immunology Letters》：PD-L1 expression in cervical cancer tissue is strongly associated with the expression of CD73/TGF-β1, the percentage of CD8+/PD-1+ T cells and disease progression
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PD-L1、CD73和TGF-β1在宫颈癌不同分期中的表达及与PD-1+ CD8+ T细胞的相关性分析。研究显示这些分子表达随病情进展递增，PD-L1与CD73、TGF-β1呈强正相关，CD8+/PD-1+细胞占比亦正相关，提示联合检测可用于预后评估及免疫治疗优化。
Mu?óz-Godínez Ricardo | Monroy-García Alberto | Hernández-Cueto ángeles María | Ramos | Pérez-Koldenkova Vadim | Molina-Castillo Gabriela | Mora-García María de Lourdes
墨西哥国立自治大学（UNAM）萨拉戈萨分校细胞分化和癌症研究单元免疫生物学实验室，墨西哥墨西哥城04510
摘要
PD-1/PD-L1信号通路在抑制抗肿瘤免疫反应中起着关键作用。我们之前报道过，腺苷（Ado）通过诱导TGF-β的产生，增加了宫颈癌（CC）细胞中程序性死亡配体1（PD-L1）的表达。我们还发现，Ado处理的CC细胞上清液能够提高CD8+ T淋巴细胞中程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）的表达。在这项研究中，我们分析了PD-L1、CD73和TGF-β的表达与正常供体（NDs）以及宫颈上皮内瘤变（CIN-I、CIN-II、CIN-III）和宫颈癌（CC）患者宫颈组织样本中PD-1表达CD8+ T淋巴细胞比例之间的关系。这项回顾性观察研究分析了未经治疗的CIN-1（n=27）、CIN-II（n=25）、CIN-III（n=23）和CC（n=23）患者的活检样本，同时以ND组织样本（n=30）作为对照。组织微阵列（TMAs）制作了三份，并用抗PD-L1、抗CD73、抗TGF-β1、抗PD-1和抗CD8单克隆抗体进行了染色。我们的结果显示，PD-L1、CD73和TGF-β1的表达以及CD8+/PD-1+ T细胞的比例在宫颈组织中增加，这与疾病进展相关。PD-L1的表达与CD73（r = 0.8274，p < 0.001）和TGF-β1（r = 0.8535，p < 0.001）呈正相关。有趣的是，在CIN-III和CC患者的宫颈组织中，PD-L1和TGF-β1的共表达显著增加。此外，CD8+细胞的百分比与PD-1的表达呈正相关（r = 0.7199，p < 0.01）。这些发现表明，PD-L1和PD-1在CC组织中的表达与CD73和TGF-β1的表达密切相关。因此，联合分析这些生物标志物对于评估疾病预后和开发提高接受免疫检查点抑制剂（ICIs）治疗的CC患者免疫疗法疗效的策略非常有用。
引言
宫颈癌（CC）是一个全球性的公共卫生挑战。2024年，世界卫生组织记录了大约660,000例新病例和超过340,000例死亡病例[1]。高风险人乳头瘤病毒（HPV-HR）感染被认为是CC发展的重要病因因素，因为它与低级别上皮内瘤变（CIN-I）的发展有关，这些病变可能进展为高级别上皮内瘤变（CIN-II/III），最终发展为CC[2]。由CD8+细胞毒性T细胞介导的免疫反应在识别和消除HPV感染细胞中起着重要作用；然而，一些HPV-HR感染的女性仍然可能发展成癌症，这表明其他因素也可能促进CC的发展。例如，免疫抑制机制在CC的发展中起着重要作用[3]。多项研究表明，肿瘤细胞表面PD-L1的表达参与了宿主抗肿瘤免疫反应的抑制，因为PD-L1与T细胞上表达的PD-1结合后，会负调节T细胞受体（TCR）信号传导，从而抑制细胞毒性T细胞，从而有利于癌症的生长、侵袭和转移[4]。PD-L1的表达在高级别CIN和大型、晚期、分化不良及转移性CC肿瘤中增加[5,6]。事实上，宫颈树突状细胞（DCs）和T细胞中PD-L1和PD-1的表达分别与HPV-HR阳性及CC的进展相关，且在许多晚期CC肿瘤中，浸润的PD-1阳性CD8+ T细胞的百分比也有所增加[7]。还有报道指出，CC组织中PD-L1的表达与既往的化疗史、性伴侣数量和怀孕次数有关，这使PD-L1被视为这种肿瘤不良预后的标志物[8]。然而，关于调节CC发展中PD-L1表达的因素知之甚少。PD-L1的表达可能受内在因素（如基因转录、转录后修饰和外泌体运输）和外在因素（包括肿瘤微环境（TME）中的细胞因子，如IL-1a、IL-27、IL-10和IL-32g）的影响[9]。此外，TGF-β已被证明可以诱导不同类型肿瘤中PD-L1的表达[10]。实际上，这种细胞因子通过在HPV-HR感染期间在宫颈建立局部免疫抑制微环境，在CC的发展中起重要作用，有利于HPV-HR感染的持续存在，并促进上皮-间充质转化（EMT），从而导致CC细胞的侵袭和转移[11]。在HPV-HR、CIN-I、CIN-II/III和晚期CC患者的血清和组织中检测到了TGF-β，其水平与疾病进展直接相关[12]。
最近，我们发现CC细胞通过与A2AR和A2BR的相互作用，在腺苷（Ado）的信号作用下产生TGF-β[13]。Ado是由ATP/ADP核苷酸的连续磷酸水解产生的，首先通过外酶CD39（ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase-1，EC 3.6.1.5）的水解活性转化为AMP，然后通过酶5′-ectonucleotidase（CD73，EC 3.1.3.5）进一步转化为Ado[14]。Ado信号通过4种受体（A1R、A2AR、A2BR和A3R）在靶细胞膜上的G蛋白偶联进行传递[15]。此外，通过CD73-Ado途径产生的TGF-β1能够诱导CC肿瘤细胞中PD-L1的表达以及CD8+ T细胞中PD-1的表达[16]，这表明该机制可能在调节CC TME中PD-L1/PD-1的表达中起重要作用。基于这些发现，本研究分析了PD-L1的表达及其与NDs和CIN-I、CIN-II、CIN-III及CC患者宫颈组织样本中CD73和TGF-β的表达以及CD8+/PD-1+ T细胞比例的关联。
临床样本
这项研究是对患者和ND数据的回顾性观察研究。研究对象包括病理学诊断为CIN-I（n=27）、CIN-II（n=25）、CIN-III（n=23）和CC（n=23）的患者，所有患者均未接受治疗。对未发生病理学改变且未感染HPV的NDs的组织样本（n=30）进行了分析，作为对照。
参与者特征
本研究使用了127份宫颈组织样本，根据病理学分析，30份样本来自NDs（补充表1），26份样本来自CIN-I患者，25份样本来自CIN-II患者，23份样本来自CIN-III患者，23份样本来自CC患者（补充表2）。ND女性的平均年龄为32.03岁（范围：26–38岁），CIN-I女性的平均年龄为33.53岁
讨论
CC仍然是全球女性癌症相关死亡的主要原因之一，尤其是在发展中国家[1,21]。一个重要的挑战是，超过一半的CC病例在晚期才被诊断出来[22]。对于局部晚期CC，标准治疗包括同步进行外部放疗和基于铂的静脉化疗。虽然化疗是复发性及转移性CC的主要治疗方法，但其疗效受到严重毒性的限制，导致预后不佳
伦理声明
本研究得到了CMN SXXI IMSS医院地方健康研究委员会的批准，用于开展项目R-2014-3602-27。由于研究的回顾性质，免除了获得知情同意的要求。
资金支持
本研究得到了以下资金的支持：DGAPA-PAPIIT基金（项目编号IN211822和IN216325）资助Mora-García María de Lourdes；墨西哥社会保障研究所（Instituto Mexicano del Seguro Social (IMSS)提供的基金（项目编号R-2023-3602-011）资助Monroy-García Alberto。这项工作还得到了UNAM博士后计划（POSDOC）对Mu?óz-Godínez Ricardo的支持。
数据可用性
本出版物中显示的所有数据，包括支持信息，均可根据要求向相应作者索取。
CRediT作者贡献声明
Mu?óz-Godínez Ricardo：撰写——初稿、方法学、研究、概念化。Monroy-García Alberto：撰写——审稿与编辑、监督、项目管理、资金获取、数据分析、概念化。Hernández-Cueto ángeles María：方法学、数据分析。Ramos：方法学、数据分析、概念化。Pérez-Koldenkova Vadim：监督、方法学、数据分析、概念化。Molina-Castillo Gabriela：监督、方法学
