A2AR拮抗剂IDPU通过调节p38MAPK/Parkin/DJ-1/DRP1轴，有助于恢复6-OHDA诱导的初级中脑神经元细胞的线粒体功能

《Purinergic Signalling》：A2AR antagonist IDPU facilitates the restoration of mitochondrial dynamics in 6-OHDA-induced primary mid-brain neuronal cells, via regulating p38MAPK/Parkin/DJ-1/DRP1 axis

帕金森病（PD）中A2A受体拮抗剂IDPU通过调节p38MAPK/DRP1/Parkin信号通路及线粒体动力学发挥神经保护作用，改善6-OHDA诱导的PMDN细胞存活率、恢复多巴胺水平并减轻氧化应激。

　　

摘要

帕金森病（PD）的特征是黑质致密部（SNpc）中多巴胺能神经元的丢失。腺苷受体（A_2ARs）调节纹状体-苍白球非多巴胺能通路，以缓解PD症状。在本研究中，使用从P₀/P₁大鼠幼崽中分离出的原代中脑神经元（PMDN）细胞，探讨了具有非嘌呤骨架的选择性A_2AR拮抗剂IDPU（K_i = 0.0038 nM）的神经保护机制。这些细胞经过分化后可形成多巴胺能神经元，这一点通过酪氨酸羟化酶验证。当PMDN细胞单独用IDPU（0–10 μM）处理时，未表现出明显的毒性。然而，在6-OHDA（150 μM）处理24小时后，细胞存活率降至60%以下。当在6-OHDA处理后3小时再用IDPU（0.7 μM或1 μM）处理时，细胞存活率恢复到80%以上，并且多巴胺水平得到恢复，同时24小时后观察到的ROS生成和[Ca²⁺]_i水平的降低也得到了改善。IDPU处理还通过抑制线粒体SOD的产生和线粒体膜电位的丢失，进一步影响线粒体功能。为了研究A_2AR拮抗剂对线粒体相关信号通路调控的机制，我们从6-OHDA（150 μM）处理后的PMDN细胞中分离蛋白质，并在IDPU（0.7 μM、1 μM）和ZM241385（1 μM）处理3小时后进行Western blot分析。结果表明，暴露于6-OHDA时，DRP1（Ser616，78 kDa）和p38MAPK（Tyr182，41 kDa）的磷酸化水平增加；然而，在A_2AR拮抗剂处理后，这些蛋白质的水平降低。相反，6-OHDA的毒性降低了Parkin（58 kDa）和DJ-1（23 kDa）的水平，而暴露于A_2AR拮抗剂（IDPU和ZM241385）后，这些蛋白质的水平有所提高。这表明A_2AR拮抗剂可能通过调节线粒体动态来促进细胞存活。这些发现首次证明IDPU在类似PD的条件下具有神经保护作用，其机制涉及p38MAPK/DRP1/Parkin信号通路，为通过A_2AR拮抗作用靶向线粒体动态提供了潜在的治疗途径。