在青少年早期反复饮酒会促使成年雄性小鼠做出更冒险的决策，并增加成年雌性小鼠的饮酒行为

《Physiology & Behavior》：Repeated Early Adolescence Ethanol Intoxication Promotes Riskier Decision-Making in Adult Males and Increases Drinking in Adult Female mice

青少年期反复酒精中毒通过性别差异影响成年期风险行为及酒精摄入。摘要：C57BL/6J小鼠在早期青少年期接受高剂量乙醇腹腔注射（3.2g/kg），成年后进行光暗箱（LDB）和 elevat加上迷宫（EPM）行为学测试，结合markov链模型分析行为转移概率。结果显示：预实验乙醇显著降低EPM焦虑样行为及风险评估复杂性，但早期酒精暴露对成年行为无显著影响。特别在LDB中，雄性小鼠风险评估行为受损，而雌性成年期自愿酒精摄入增加。

　　

Leticia Souza Pichinin | Myrna Guernelli | Marianna Nogueira Cecyn | Beatriz Deo Sorigotto | Karina Possa Abrah?o

巴西圣保罗联邦大学（UNIFESP）保罗医学院心理生物学研究生项目

摘要

青少年中酗酒行为较为普遍，这会带来短期和长期的不良后果。本研究评估了青春期早期反复摄入乙醇导致的中毒对成年早期行为的影响。5周大的C57BL/6J雄性和雌性小鼠接受了腹腔注射：一组注射生理盐水（对照组），另一组注射3.2克/千克的乙醇（中毒组）。在注射后的第1天和第4天，对中毒组小鼠进行了血液检测，证实其乙醇浓度高达约289毫克/分升。9周大时，这些小鼠在光照-黑暗箱（LDB）和升高平台迷宫（EPM）中接受了测试。在LDB实验中，青春期早期的中毒并未影响焦虑相关行为，但降低了雄性小鼠的风险评估行为，表明其决策更加冒险。测试前并未观察到乙醇的任何影响。在EPM实验中，测试前的乙醇暴露具有抗焦虑作用，表现为探索行为增加和风险评估行为减少；而青春期中毒则没有显著影响。为了更全面地分析行为变化，我们使用马尔可夫链模型量化了从风险评估状态转换到其他状态的概率。分析结果显示，测试前的乙醇暴露显著降低了行为结构的复杂性，尤其是在EPM实验中；而青春期中毒则没有明显的生态学效应。此外，另一组对照组和中毒组小鼠在成年后进行了双瓶选择间歇性夜间饮酒实验，结果发现青春期乙醇暴露增加了雌性小鼠的自愿饮酒量，而雄性小鼠未受影响。这些发现强调了青春期早期中毒对风险相关行为和酒精消费的长期且性别特异性的影响。

引言

偶发性乙醇中毒会增加受伤和其他危险情况的风险，是日后发展成酒精使用障碍（AUD）的风险因素[1]。在巴西，5%的青少年（12-17岁）和20.5%的年轻人（18-24岁）在过去30天内至少有过一次酗酒经历[2]。根据美国国立卫生研究院（NIH）下属的国家酒精滥用与酒精中毒研究所（NIAAA）的定义，酗酒是指在两小时内摄入4到5杯标准饮品，导致血液中的乙醇浓度（BEC）超过80毫克/分升[3]。然而，高强度饮酒（二级：8-10杯；三级：12-15杯）会导致更高的BEC，超过200毫克/分升，这一浓度被世界卫生组织认定为危险水平[3]。在这种情况下，乙醇中毒会损害运动控制和认知功能，导致嗜睡，甚至在某些情况下失去意识[4]。此外，还可能引发顺行性遗忘（即“断片记忆”[5,6]。

C57BL/6小鼠因其较高的自愿饮酒量而被广泛用作研究乙醇中毒的动物模型。然而，这些小鼠通常不会饮酒到BEC超过200毫克/分升或失去意识的程度。因此，需要通过实验者主动给予乙醇来实现高浓度中毒。为了模拟高强度中毒，BEC需达到200毫克/分升或更高，这通常需要摄入3.0克/千克以上的乙醇[7]。在这种剂量下，小鼠可能会丧失恢复体位反射（LORR），即动物在仰卧时无法自行调整身体姿势的能力。值得注意的是，即使是2.4克/千克的较低剂量也会产生记忆障碍[8]。 青春期是一个行为抑制减弱、冲动性增加和冒险行为增强的发育阶段，这些因素与酒精滥用和饮酒量上升密切相关[9,10]。此外，青春期乙醇中毒可能导致青少年时期的行为特征持续到成年[11,12,13,14,15]。越来越多的证据表明，青少年时期的乙醇暴露会使人倾向于表现出抑制控制能力差、风险评估能力不足以及决策更加冒险的行为特征[16,17,18,19,20]。然而，关于青春期早期乙醇中毒对成年后焦虑相关行为、探索行为和风险评估行为之间复杂关系的长期影响的研究仍有限，尤其是在性别差异和基于生态学的行为测量方面[21,22]。 在本研究中，我们探讨了青春期早期反复的高强度乙醇暴露如何影响成年后雌性和雄性C57BL/6小鼠的焦虑相关行为、探索策略、风险评估能力和自愿饮酒行为。通过模拟与人类高强度饮酒相关的乙醇暴露水平，本研究旨在阐明在发育脆弱期接触乙醇如何影响成年后的风险相关行为特征。

实验细节

实验动物

本研究获得了圣保罗联邦大学（UNIFESP）动物使用伦理委员会（CEUA）的批准（批准编号：#2423170220），实验符合国家动物实验控制委员会（CONCEA）的规定。实验所用C57BL/6小鼠来自生物医学实验模型开发中心（CEDEME）。小鼠在4周大时被分组饲养在自动通风的笼子中（Alesco ALBR）。

实验1：确认重度中毒的高BEC

并非所有小鼠在乙醇暴露后都丧失了恢复体位反射：第1天有25%的小鼠未丧失该反射，第2天为37%，第3天为30%，第4天为31%。这些数据表明小鼠对乙醇诱导的嗜睡反应存在个体差异。对于丧失反射的小鼠，我们分析了它们在实验1中的恢复体位反射潜伏期（LORR），未发现日期（X2₍₁₎ = 1.71）、性别（X2₍₁₎ = 0.86）或性别与日期的交互作用（X2₍₃₎ = 0.61对LORR有显著影响。

讨论

乙醇暴露会以复杂的方式影响行为，这取决于剂量、年龄和性别等因素。因此，研究先前接触乙醇（尤其是在青春期）的个体在后期生活中是否以及如何出现行为变化非常重要。本研究发现，青春期早期的乙醇中毒降低了成年后雄性小鼠在光照-黑暗箱（LDB）中的风险评估行为，而雌性小鼠则未受影响。

作者贡献声明

Leticia Souza Pichinin：概念构建、数据整理、数据分析、可视化处理、撰写初稿、审稿与编辑。 Myrna Guernelli：数据整理、数据分析、可视化处理、撰写初稿、审稿与编辑。 Marianna Nogueira Cecyn：概念构建、数据整理、数据分析、可视化处理、软件应用、撰写初稿、审稿与编辑。 Beatriz Deo Sorigotto：概念构建、数据整理、数据分析、可视化处理、撰写初稿、审稿与编辑。

资金支持

本研究得到了圣保罗州研究支持基金会（FAPESP，资助编号#2019/01686-0）和学生奖学金#2020/06214-6、巴西国家科学技术研究与发展委员会（CNPq Universal，资助编号434092/2018-5和学生奖学金#152134/2023-9）以及国际脑研究组织（IBRO）2019年Return Home奖学金的支持。同时，我们也感谢巴西高等教育人员培训协调局（CAPES）提供的基础设施支持。

数据获取

数据可应要求提供。

关于写作过程中使用生成式AI和AI辅助技术的声明

在撰写本文期间，作者使用了ChatGPT辅助英文语法处理。使用该工具/服务后，作者对内容进行了必要的审核和编辑，并对出版物的内容负全责。

作者贡献声明

Leticia Souza Pichinin：撰写与编辑、撰写初稿、可视化处理、方法学研究、概念构建。 Myrna Guernelli：撰写与编辑、撰写初稿、可视化处理、数据验证、软件应用、方法学研究。 Marianna Nogueira Cecyn：撰写与编辑、撰写初稿、可视化处理、数据验证、软件应用。 Beatriz Deo Sorigotto：撰写与编辑、撰写初稿。

利益冲突声明

作者声明不存在利益冲突。

致谢

我们感谢CIATox Unicamp的José Luiz da Costa博士和Aline Martins在血液乙醇浓度（BEC）分析方面的合作，以及Paula Mendon?a Camargo Eduardo博士和Mariana Cardoso Melo在IOD实验中的协助。