KPT-8602与IFN-γ联合使用可释放ZBP1-PANoptosome，从而抑制原发性中枢神经系统淋巴瘤的进展

《Experimental Cell Research》：KPT-8602 combined with IFN-γ released ZBP1-PANoptosome to inhibit the progression of primary central nervous system lymphoma

PCNSL治疗研究中，KPT-8602与IFN-γ联合通过激活ZBP1介导的PANoptosis通路显著抑制淋巴瘤细胞增殖并诱导凋亡，小鼠模型显示肿瘤体积缩小及炎症因子上调，为PCNSL治疗提供新策略。

　　

魏江|冉楠楠|王婷婷|马晓晓

中国山东省济南市山东第一医科大学附属中心医院肿瘤科

摘要

目的

研究KPT-8602与干扰素-γ（IFN-γ）联合使用是否可以通过激活ZBP1介导的PANoptosis来抑制原发性中枢神经系统淋巴瘤（PCNSL）的进展。

方法

本研究使用了包括Raji（伯基特淋巴瘤）和U-2932（弥漫大B细胞淋巴瘤，DLBCL）在内的人类淋巴瘤细胞系。通过CCK8检测、流式细胞术、YO-PRO/PI染色和Western blot分析评估了KPT-8602和IFN-γ对PANoptosis的协同诱导作用。通过立体定向脑植入建立了PCNSL的小鼠模型，并使用HE染色、TUNEL染色、ELISA、多重免疫荧光和Western blot分析评估了联合治疗的疗效和分子机制。

结果

KPT-8602与IFN-γ的联合治疗对淋巴瘤细胞生长表现出协同抑制作用（CI < 1）。联合治疗组显著增强了细胞凋亡和PANoptosis，并上调了与PANoptosis相关的炎症因子（IL-18、IL-1β）的mRNA水平以及PANoptosis相关蛋白的表达。在裸鼠模型中，联合治疗组的肿瘤体积明显小于单药组。此外，肿瘤组织中的TUNEL染色阳性率显著增加，脑脊液中的炎症因子IL-6和CXCL13水平也升高。肿瘤组织的Western blot分析与体外实验结果一致，表明PANoptosis通路被显著激活。

结论

KPT-8602与IFN-γ的联合使用可以通过上调ZBP1来激活pan-apoptotic通路，从而有效抑制PCNSL的生长。本研究提出了一种有前景的PCNSL新联合治疗策略。

引言

原发性中枢神经系统淋巴瘤（PCNSL）是一种罕见且侵袭性强的非霍奇金淋巴瘤（NHL），主要影响脑实质、脊髓、软脑膜和眼睛。超过95%的患者被诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤。PCNSL在所有类型的NHL中预后最差[1]。近年来，PCNSL的发病率逐年上升，五年生存率仅为29.9%[2]。PCNSL占新诊断脑肿瘤的3%至4%，以及结外淋巴瘤的4%至6%。该疾病可发生在任何年龄，发病中位年龄为65岁[3]。单纯手术切除病变并不能为PCNSL患者带来显著的生存益处，反而可能延迟化疗的开始并导致手术并发症，因此不推荐作为PCNSL的治疗方法。手术仅可用于治疗肿瘤引起的难治性脑水肿和明确肿瘤诊断[4]。目前，高剂量甲氨蝶呤（HD-MTX）联合治疗是PCNSL的一线治疗方法。然而，研究表明HD-MTX疗效有限且短期复发率较高[5]。鉴于PCNSL的高侵袭性、缺乏特异性临床症状、疾病进展迅速和预后不良，迫切需要开发新的药物和创新疗法。

PANoptosis是一种高度协调和动态平衡的炎症细胞死亡通路，整合了焦亡（pyroptosis）、凋亡（apoptosis）和坏死（necrosis）的关键分子特征[6]。PANoptosis的发生主要由一个称为PANoptosome的大分子复合物调控。该复合物包括三种类型：Z-DNA结合蛋白1（ZBP1）PANoptosome、缺失于黑色素瘤2（AIM2）PANoptosome和受体相互作用蛋白激酶1（RIPK1）PANoptosome。这些复合物的组成取决于细胞遇到的触发因素[7]。其中，ZBP1是一种肿瘤相关蛋白，在干扰素-γ（IFN-γ）或脂多糖（LPS）的作用下强烈诱导，在先天免疫反应中起关键作用[8]。早期关于ZBP1的研究主要集中在病毒感染上，建立了病原体相关分子模式（PAMPs）和损伤相关分子模式（DAMPs）与细胞内促炎信号转导之间的联系。这一过程涉及坏死性凋亡和炎症反应，最终触发细胞死亡通路[9]，[10]。此外，ZBP1在非病毒性疾病（包括癌症[11]和皮肤炎症[12]）中的重要作用也已被证实。

Eltanexor（KPT-8602）是一种核输出抑制剂（NEI），可与重组输出蛋白1（XPO1）结合，导致肿瘤抑制蛋白在细胞核内积累。KPT-8602于2022年1月获得美国食品药品监督管理局（FDA）的“孤儿药”资格，主要用于治疗骨髓增生异常综合征（MDS）[13]。研究表明，KPT-8602通过稳定重组核磷蛋白1（NPM1）的乙酰化并促进肝细胞癌中的上皮-间充质转化（EMT）来增强对索拉非尼的耐药性[14]。此外，KPT-8602与Poly-ADP核糖聚合酶（PARP）抑制剂联合使用可增强转移性去势抵抗性前列腺癌（mCRPC）细胞的凋亡[15]。干扰素-γ（IFN-γ）是由活化的T细胞和自然杀伤（NK）细胞分泌的II型干扰素，具有多种免疫调节功能，通过抑制肿瘤细胞增殖和血管生成、调节肿瘤免疫微环境以及增强免疫监视来发挥抗肿瘤作用[16]，[17]。最近的研究表明，干扰素-β（IFN-β）和核输出抑制剂KPT330可以协同作用，提高骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）的死亡率[18]。此外，含有CARD（ASC）、caspase-8和受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）的凋亡相关斑点蛋白在肿瘤细胞中也有共定位[19]。然而，目前NEI/IFN联合治疗仅限于黑色素瘤和结直肠癌[18]，在PCNSL领域尚未进行研究。鉴于KPT-8602的不良事件发生率较低且具有较好的脑渗透性[20]，KPT-8602与IFN-γ的联合使用可能通过释放PANoptosome有效清除PCNSL肿瘤细胞，为治疗这种致命疾病提供一种新策略。

实验部分

细胞培养和分组

人类伯基特淋巴瘤细胞（Raji细胞，SNL-048）和人类弥漫大B细胞淋巴瘤细胞（U-2932，SNL-608）购自SUNNCELL（中国）。这两种细胞在含有10%胎牛血清（FBS，16000-044，Gibco，美国）和1%青霉素-链霉素（P/S，60162ES76，Yeasen，中国）的RPMI 1640培养基（R8758，Sigma，美国）中培养。所有细胞均在5% CO₂和37°C的培养箱中培养。

为了研究...

KPT-8602和IFN-γ联合治疗协同抑制了Raji和U-2932细胞的增殖

首先进行了初步实验，以确定KPT-8602和IFN-γ的最佳浓度。使用CCK8检测评估了不同浓度（0、0.08、0.16、0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20、30、40和50 μM）的KPT-8602以及不同浓度（0、0.125、0.25、0.5、1、2、4、5、6、8、10、20、30、40和50 μg/mL）的IFN-γ对Raji和U-2932细胞活力的影响。结果显示，KPT-8602在两种细胞系中均表现出剂量依赖性的抑制作用，IC₅₀值分别为...

讨论

由于PCNSL独特的免疫抑制性肿瘤微环境和血脑屏障（BBB）形成的保护屏障，其在临床治疗中一直是一个重大挑战[25]，[26]。目前的标准化疗方案依赖于高剂量的甲氨蝶呤，不仅会产生严重的副作用，还会导致显著的耐药性，从而影响预后和增加复发率[27]。因此，...

CRediT作者贡献声明

马晓晓：撰写 – 审稿与编辑。冉楠楠：数据可视化、方法学设计。王婷婷：数据验证、实验实施。魏江：初稿撰写、实验设计

出版同意

不适用。

伦理声明

我们的动物实验符合《动物研究：体内实验报告》（ARRIVE）指南，并获得了山东第一医科大学附属中心医院伦理委员会的批准（伦理批准编号：No.2023101）。

数据可用性声明

由于保密原因，本研究生成和/或分析的数据集不对外公开，但可根据合理请求向通讯作者获取。

利益冲突声明

作者声明没有已知的可能影响本文工作的利益冲突。

参与同意声明

不适用。

资助

无。

利益冲突声明

作者声明没有已知的可能会影响本文工作的财务利益或个人关系。