亚油酸对大肠杆菌脂多糖诱导的水牛黄体细胞培养中的氧化和硝化毒性的保护作用

《BMC Veterinary Research》：Protective effects of linoleic acid against E. coli lipopolysaccharide-induced oxidative and nitrosative toxicity in buffalo luteal cell culture

本研究探究不同浓度的大肠杆菌脂多糖（LPS）对水牛黄体细胞（LCs）线粒体功能的影响，并评估亚油酸（LA）联合高剂量LPS对LC性能的保护作用。方法：从屠宰后1-2小时内获取含黄体卵巢（n=21），分离LCs并用台盼蓝染色验证活性，预培养后分两组实验：第一组暴露不同LPS浓度（0.25-32μg/mL），MTT法检测0、24、48h线粒体功能；第二组固定LPS毒性浓度（8μg/mL），联合不同LA浓度（0.125-1mM），检测线粒体功能、总抗氧化能力（TAC）、脂质过氧化产物（LHPO、MDA）及硝酸盐-亚硝酸盐（TNN）水平。结果：LA在0.25、0.5mM时显著提升线粒体功能（P<0.05）及TAC水平（P<0.05），同时降低MDA（P=0.038）和TNN指数（P<0.001）。结论：LA通过减轻氧化应激和硝基毒性保护黄体细胞，提示LA强化饲料可能改善母牛繁殖性能。

　　

摘要

背景

本研究旨在探讨不同浓度的大肠杆菌脂多糖（LPS）对水牛黄体细胞（LCs）线粒体功能的影响，并评估亚油酸（LA）在与毒性LPS共同作用时对LCs性能的保护作用，特别是在原代培养过程中。

方法

屠宰后1-2小时内将含有黄体的卵巢（共21个）运送到实验室。分离出LCs并通过台盼蓝染色验证其存活能力后，对细胞进行预培养。首先，在24孔培养板中将LCs暴露于不同浓度的LPS（0.25、0.5、1、2、4、8、16和32 μg/mL）中。在培养0、24和48小时时使用MTT检测法评估线粒体功能。在第二项实验中，将不同浓度的LA（与牛血清白蛋白结合）（0.125、0.25、0.50和1 mM）加入LCs培养基中，并同时加入恒定剂量的LPS（8 μg/mL）。在培养0、24和48小时时分别检测线粒体功能、总抗氧化能力（TAC）、脂质过氧化物（LHPO）含量、丙二醛（MDA）以及总硝酸盐-亚硝酸盐（TNN）含量。实验1和2各包含四次独立重复，每个实验组采用四重复设计。

结果

特别是当LA的浓度为0.25和0.50 mM时，与LPS联合使用可增强线粒体功能，并在24和48小时时提高TAC水平（P < 0.05）。LA的添加对总LHPO含量没有影响。在48小时时，0.25、0.50和1 mM剂量的LA处理显著降低了TNN指数（P < 0.001）。同样，所有剂量的LA在24和48小时时均显著降低了MDA指数（P = 0.038）。

结论

LA可以通过减少氧化应激和过氧化毒性以及上调抗氧化水平来减轻大肠杆菌LPS对水牛LCs的损害作用。这些发现表明，富含LA的饲料值得进一步研究其对水牛发情期受孕的影响。