志传灵口服液通过IL-4–JAK1–STAT6和KIT信号通路缓解Th2型哮喘

《Journal of Ethnopharmacology》：Zhi Chuan Ling oral liquid alleviates Th2-type asthma via IL-4–JAK1–STAT6 and KIT signaling pathways

中药有效成分 | Th2型哮喘 | IL-4/STAT6信号通路 | KIT通路 | 槲皮素 | 连翘苷 | 异连翘苷 | 蛋白质组学 | 鼻烟酮依赖性炎症 | 丝裂原活化蛋白激酶 | 风湿免疫病 | 药效物质基础 | 药效基因组学

　　

姜杰|周贤强|翁定洲|王洪涛|金正杰|韩静妍|刘健|冯翠玲

中国北京北京大学人民医院

摘要

民族药理学相关性

知川灵口服液（ZCL）在传统中医中长期以来被用于治疗哮喘。然而，ZCL如何作用于Th2型哮喘及其活性成分仍不清楚

研究目的

本研究旨在利用卵白蛋白（OVA）诱导的Th2型哮喘模型，探讨ZCL在干预Th2型哮喘中的机制及其潜在活性物质。

材料与方法

建立了一种OVA致敏和诱发的Th2型哮喘小鼠模型，以评估ZCL对气道高反应性、支气管肺泡灌洗液（BALF）中Th2型炎症效应细胞和细胞因子的影响。通过蛋白质组学方法鉴定ZCL在Th2型哮喘中的潜在靶点，并利用分子生物学、生物信息学和LC-MS技术在体外和体内进行验证。

结果

ZCL缓解了Th2型哮喘小鼠的气道高反应性和气道炎症，降低了肺组织中TGF-β mRNA的表达，减少了BALF中的嗜酸性粒细胞、肥大细胞和Th2细胞因子的数量。蛋白质组学分析表明，ZCL可能通过IL-4和KIT信号通路调节Th2型哮喘。Western blotting显示，ZCL降低了IL-4的下游p-JAK1/JAK1和p-STAT6/STAT6比值，并减少了肺组织中KIT和Tryptase的表达。生物信息学分析、LC-MS和体外实验表明，芦丁、连翘苷和异连翘苷可能是ZCL中负责干预上述靶点的关键成分。

结论

ZCL通过抑制IL-4和KIT信号通路可以改善Th2型哮喘。芦丁、异连翘苷和连翘苷可能是介导这些保护作用的关键生物活性成分。

引言

支气管哮喘是一种异质性的慢性气道疾病，其特征是气流受限、气道高反应性（AHR）和持续的气道炎症（全球哮喘倡议，2025年；Papi等人，2018年）。在目前公认的炎症类型中，由T辅助2（Th2）细胞和2型先天淋巴细胞驱动的Th2型哮喘占临床病例的绝大多数（Holgate，2012年；Kuruvilla等人，2019年）。吸入性皮质类固醇联合支气管扩张剂仍然是Th2型哮喘治疗的基石（d'Ancona等人，2025年）。然而，仍有相当一部分患者病情控制不佳、出现治疗相关不良反应或急性加重（Chung等人，2014年；Israel和Reddel，2017年）。这些未满足的需求激发了人们对能够同时调节多个关键炎症途径的多靶点治疗策略的兴趣。

Th2型哮喘的一个特征是气道中持续增强的2型炎症反应，主要由IL-4、IL-5和IL-13等细胞因子主导，伴有嗜酸性粒细胞浸润和IgE介导的过敏反应（Ogulur等人，2025年）。在这个复杂的细胞因子网络中，IL-4处于关键的上游位置（Gandhi等人，2016年）。作为驱动幼稚CD4⁺ T细胞分化为Th2细胞的决定性因素，IL-4建立了偏向2型的免疫环境，并作为B细胞向IgE转换的中心指令信号，从而启动下游的过敏级联反应（Gandhi等人，2016年；Nelms等人，1999年）。在这种IL-4引发和放大的炎症背景下，IL-13协同作用于气道上皮，导致黏液过度分泌和气道重塑，而IL-5则在嗜酸性粒细胞的招募、激活和延长存活中起更重要的作用（Jackson等人，2024年；Sahnoon等人，2025年）。这些细胞因子共同维持了慢性气道损伤和AHR。因此，针对IL-4及其下游信号通路是干预Th2型哮喘的关键策略（Sahnoon等人，2025年）。

肥大细胞是Th2型哮喘中的另一个关键效应细胞群体（Pahima和Dwyer，2025年）。它们的激活由IgE–FcεRI通路和干细胞因子（SCF）–KIT轴共同调节，并在Th2炎症微环境中进一步增强（Gilfillan和Tkaczyk，2006年）。由气道上皮细胞、成纤维细胞和其他结构细胞产生的SCF与肥大细胞上高度表达的酪氨酸激酶KIT结合，从而促进其在气道内的存活、增殖和迁移（Lennartsson和R?nnstrand，2012年；Tsai等人，2022年）。在此基础上，过敏原驱动的IgE–FcεRI交联更容易触发肥大细胞脱颗粒并释放多种炎症介质，导致支气管平滑肌收缩和黏液过度分泌，与嗜酸性粒细胞一起放大和持续Th2型气道炎症（Greene等人，2025年）。因此，针对SCF诱导的肥大细胞激活是治疗Th2型哮喘的另一个关键途径。

ZCL由连翘果（Forsythia suspensa (Thunb.) Vahl）、颠茄花（Datura metel L.）、麻黄草（Ephedra sinica Stapf）和苦杏仁仁（Prunus armeniaca L.）组成，在中国广泛用于缓解支气管哮喘和其他慢性气道疾病患者的咳嗽、喘息和咳痰症状（中国国家药品批准号：Z20030139）。ZCL的处方可以追溯到《太平惠民和济方》中记载的经典方剂三拗汤，以及清代医生张珏珍在《外科世三方考》中记录的抗哮喘经验方剂李枝川消痰（Wang等人，2021年）。目前的ZCL制剂是在这些传统方剂的基础上开发和优化的，被配制成即用型口服液以便患者使用。临床经验表明，ZCL可用于治疗支气管哮喘并缓解患者的喘息症状。然而，其潜在机制仍不清楚，其有效成分也尚未得到系统研究。

在本研究中，我们通过OVA诱导的致敏建立了Th2型哮喘模型。基于蛋白质组学数据指出的IL-4信号通路和KIT信号通路，我们对ZCL在干预Th2型哮喘中的机制及其潜在生物活性成分进行了系统研究。

药物制备

知川灵口服液由苏中药业集团有限公司提供，成分包括连翘果、颠茄花、麻黄草和苦杏仁仁。

动物和实验组

从北京维塔河实验动物技术有限公司获得了特定病原体-free（SPF）的BALB/c小鼠（6–8周龄，18–22克）。动物在受控条件下饲养（23–26°C，40–65%相对湿度，12小时光照/黑暗周期），并可自由摄取食物和水。适应一周后，

ZCL可减轻OVA诱导的哮喘小鼠的气道高反应性

最后一次OVA刺激后4小时，小鼠被麻醉，气管插管并连接至呼吸机，并建立静脉通路。通过逐渐增加浓度的乙酰胆碱静脉注射来评估气道高反应性。与正常对照组相比，OVA模型组的小鼠表现出显著增加的呼吸阻力（RL，图1B）和降低的动态顺应性（Cdyn，图1C）

讨论

ZCL在临床实践中长期以来被用于缓解咳嗽、喘息和咳痰，但其确切的作用机制尚未完全阐明。本研究显示，ZCL可以调节Th2型哮喘。通过整合表型分析、蛋白质组学分析和体外实验，我们发现ZCL通过协调调节IL-4–JAK1–STAT6轴和KIT–肥大细胞信号通路来减轻OVA诱导的2型气道炎症，并且连翘苷

CRediT作者贡献声明

韩静妍：撰写 – 审稿与编辑，监督，资源管理，项目管理，概念构思。金正杰：验证，研究，数据管理。王洪涛：撰写 – 审稿与编辑，概念构思。冯翠玲：监督，项目管理，方法学，资金获取，概念构思。刘健：撰写 – 审稿与编辑，监督，项目管理，方法学，概念构思。翁定洲：可视化，验证，方法学。

未引用的参考文献

d'Ancona等人，2025年；全球哮喘倡议，2025年。

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数据可用性

数据将应要求提供

资助

本研究部分得到了中国中医药协会联合研究项目的支持（项目编号2023DEPLHGG-02）。

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。