《Alzheimers & Dementia》：The Alzheimer's Disease Diagnosis and Plasma Phospho-Tau217 (ADAPT) study stage 1: Validating clinical cut-points against CSF and amyloid PET
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本研究系统验证了两种商用血浆p-tau217检测方法（Lumipulse与ALZpath）对阿尔茨海默病（AD）的诊断效能。文章确立了用于临床诊断的高性能双截断值（Lumipulse: 0.153/0.422 pg/mL），证实了该标志物对样本前处理变异及慢性肾病（CKD）影响的稳定性，为AD血液检测的临床转化与后续随机对照试验（RCT）奠定了关键基础。
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文章内容归纳总结
背景
阿尔茨海默病（AD）的诊断传统上依赖于临床评估、结构影像以及脑脊液（CSF）或淀粉样蛋白正电子发射断层扫描（PET）等分子工具。引入有效的血液检测将减少对侵入性CSF采样或昂贵的淀粉样蛋白PET的需求，并提高在缺乏现有分子工具的环境中实现早期准确诊断的可及性。在众多血浆生物标志物中，血浆中苏氨酸217位点磷酸化的tau蛋白（p-tau217）已被确认为区分AD与其他神经退行性疾病的特异性强、性能高的生物标志物。目前，Lumipulse自动化平台和ALZpath检测是两种市售的血浆p-tau217检测方法，均展现出较高的诊断性能。然而，为了可靠地将其整合到诊断路径中并最大程度减少错误分类和误诊风险，必须建立并验证其临床截断值。
AD诊断与血浆磷酸化Tau217（ADAPT）研究是一项英国多中心研究，旨在分阶段推进血浆p-tau217的临床应用。本研究报道了其第一阶段的核心工作：比较Lumipulse与ALZpath两种检测方法，针对脑脊液（CSF）和淀粉样蛋白PET定义的AD状态，确定并验证用于临床的最佳p-tau217诊断截断值。同时，研究还探讨了前处理因素、慢性肾病（CKD）以及检测试剂批间差异对p-tau217浓度的影响，为后续临床试验的样本处理提供指导。
方法
研究纳入了来自不同医疗机构、基于不同金标准确诊的三个独立队列：1. CSF队列（n=257）：患者来自伦敦大学学院医院认知诊所，基于Lumipulse检测的CSF Aβ42/Aβ40比值（≤0.065）定义AD生物标志物阳性状态（即“仅淀粉样蛋白”定义）。此外，还使用了“淀粉样蛋白与p-tau”定义、基于临床诊断的定义、Malm?队列定义和FDA定义进行敏感性分析。2. 淀粉样蛋白PET队列（n=76）：患者来自帝国理工学院医疗保健信托认知诊所，通过18F-florbetaben PET视觉读片定义淀粉样蛋白阳性状态。3. CKD队列（n=58）：参与者为年龄小于60岁、认知功能正常的常染色体显性多囊肾病（ADPKD）患者，用于评估肾功能损害对p-tau217的影响。
所有样本均使用Lumipulse G1200全自动免疫分析平台和ALZpath p-tau217 v2试剂盒（在Simoa HD-X平台上运行）进行血浆p-tau217检测，样本处理和分析过程遵循标准化方案。通过受试者工作特征（ROC）分析确定截断值，并采用了双截断值方法，旨在实现≥95%的敏感性和特异性，同时将结果处于中间区域（“不确定”）的比例控制在20%以内。统计分析还包括了评价两种检测方法的相关性、性能比较、阴性预测值（NPV）、阳性预测值（PPV）和总体准确性等。
此外，研究还设计了四项独立的预分析处理实验，评估离心前延迟、离心后延迟、储存温度和冻融循环对p-tau217浓度的影响。同时，评估了Lumipulse试剂不同批号（包括v1和v2版本）之间的检测变异性，以及血浆样本在-20°C和-80°C条件下储存运输的差异。
结果
队列特征
CSF队列平均年龄63.3岁，其中61.9%为AD阳性。淀粉样蛋白PET队列平均年龄68.3岁，其中63.2%为PET视觉读片阳性。CKD队列参与者年龄较轻，无认知症状。
检测性能比较
两种检测方法在CSF队列和淀粉样蛋白PET队列中均显示出良好的相关性（Spearman rho分别为0.86和0.84）。在区分AD与非AD时，Lumipulse检测显示的中位数倍数变化（6.7倍）高于ALZpath检测（4.2倍）。
AD状态分类效能
以CSF“仅淀粉样蛋白”定义为金标准，Lumipulse p-tau217单独预测AD的ROC曲线下面积（AUC）为0.947，ALZpath为0.940，均显著优于仅包含年龄和性别的模型（AUC 0.673）。在淀粉样蛋白PET队列中，两种检测方法单独预测AD的AUC也均显著高于基础模型（约0.88）。加入年龄、性别、肌酐或体重指数（BMI）等协变量并未显著改善模型的AUC。
临床截断值推导与验证
对于Lumipulse检测，在CSF队列中，为实现95%敏感性和97%特异性，推导出的最佳双截断值为0.153 pg/mL（下截断值）和0.422 pg/mL（上截断值）。应用此截断值时，有19.4%的结果落入中间区域。在此队列中，下截断值的阴性预测值（NPV）为90.4%，上截断值的阳性预测值（PPV）为97.6%，对于获得明确低（非AD）或高（AD）分类的个体，总体准确性为94.7%。对于ALZpath检测，95%敏感性和95%特异性的双截断值为0.220 pg/mL和0.486 pg/mL，中间区域比例为23.4%。
将CSF队列推导的Lumipulse截断值（0.153/0.422 pg/mL）应用于独立的淀粉样蛋白PET队列进行验证，结果中间区域比例升至34.2%，NPV为88.9%，PPV为90.6%，总体准确性为90.0%。
慢性肾病的影响
在认知正常的CKD患者中，应用上述Lumipulse截断值，仅有5.1%（3/58）的样本高于上截断值，但43.1%的样本落入了中间区域。随着CKD分期（1至4期）的增加，p-tau217的中位浓度呈上升趋势，但大多数仍处于低值或中间区域。统计分析显示，在调整年龄、性别和BMI后，CKD与p-tau217水平之间未显示出统计学上的显著关联。这表明CKD可能导致部分个体p-tau217水平轻度升高至中间区域，但通常不会导致假阳性（高值）结果。
预分析变异性
两项检测均显示出对预分析处理变异的稳健性。对于Lumipulse检测，在离心前延迟、冻融循环等条件下未观察到显著变化；仅在离心后样品于2-8°C冷藏4-24小时时，观察到约5%的轻微下降，而储存于-20°C两周则可维持稳定。对于ALZpath检测，仅在离心前室温放置1小时观察到轻微下降，但3小时后恢复正常。所有观察到的变化中位相对变化均未超过被认为具有临床意义的±10%阈值。
检测试剂批间变异
比较四个不同批号的Lumipulse试剂盒（两个v1版，两个v2版），结果显示p-tau217测量值在不同批号间具有极强的相关性（rho > 0.95），回归分析与单位线无系统差异。在30个样本中，仅有个别样本（3个）的分类因批号不同而发生改变，且并非由同一批号导致。
样本运输温度比较
血浆样本在-20°C储存和运输（使用Bio-Freeze设备）与在-80°C储存和干冰运输条件下测得的Lumipulse p-tau217浓度具有极佳的相关性（rho=0.998），且无系统偏差，证明使用-20°C控温运输系统是可行的。
讨论
本研究作为ADAPT研究的第一阶段，成功验证了血浆p-tau217在AD诊断中的高准确性，并为Lumipulse检测确立了具有高敏感性和特异性的临床双截断值。尽管两种检测方法相关性良好，但Lumipulse在倍数变化和减少中间区域结果比例方面表现更优。这可能与两种检测方法使用的抗体表位不同、检测平台和自动化程度差异有关，也突显了未来建立统一标准品和参考方法以实现检测间标准化的必要性。
推导出的截断值与已发表的其他研究结果具有可比性，但应用于淀粉样蛋白PET队列时中间区域比例升高，这可能与该队列使用PET视觉读片（而非定量分析）作为金标准，或两个队列间淀粉样蛋白和tau病理负担的差异有关。
研究证实血浆p-tau217对广泛的预分析处理变异（包括延迟离心、冷藏、冻融）具有出色的稳定性，支持其在即时-80°C储存不便的远程医疗环境中的应用。推荐的样本处理方案包括：血液在离心前可在室温存放3小时或冷藏24小时；血浆可在-20°C或2-8°C储存最多2周；最多可进行4次冻融循环；可使用-20°C控温运输系统（无需干冰）进行运输。
此外，Lumipulse检测试剂批间变异极小，为高通量临床服务的可靠性提供了保障。慢性肾病虽可能使部分认知正常个体的p-tau217水平轻度升高至中间区域，但极少导致假阳性高值，提示在解释结果时应结合临床背景。
未来方向
基于以上结果，Lumipulse血浆p-tau217检测现已部署于经英国认证服务机构（UKAS）认证的英国国家医疗服务体系（NHS）实验室。ADAPT研究的后续阶段将评估这些截断值随时间的稳定性，并在英国地理和种族多元化的记忆门诊人群中进行一项随机对照试验，评估向患者和临床医生披露p-tau217检测结果对AD诊断比例的临床效用影响。这项研究为推进AD血液生物标志物从研究走向临床常规应用迈出了坚实的一步。
