《Cytotherapy》：Equivalent CD34+ selection outcomes with CliniMACS Prodigy and CliniMACS Plus, enabling cryopreserved product processing
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免疫选择过程验证及全自动设备性能评估：比较CliniMACS Plus与Prodigy在新鲜及解冻外周血干细胞分离中的CD34+纯度（95%-97%）、回收率（53%-66%）、T细胞清除效率（0.1×10? vs. 0.4×10?/千克）及自动化优势（操作时间从5小时缩短至2小时）。
安妮-莉娜·沙托（Anne-Line CHATEAU）、克莱芒斯·德梅尔（Clémence DEMERLE）、皮埃尔·利涅（Pierre LIGNEE）、利奥内尔·雷吉姆博（Lionel REGIMBAUD）、克里斯托弗·马特拉（Christophe MARTELLA）、安杰拉·格拉纳塔（Angela GRANATA）、卡琳·马伦芳特（Carine MALENFANT）、索菲·特维内（Sophie THEVENET）、克里斯蒂安·沙巴农（Christian CHABANNON）、克劳德·勒马里（Claude LEMARIE）、鲍里斯·卡尔梅尔斯（Boris CALMELS）
法国马赛保罗-卡尔梅特研究所（Institut Paoli-Calmettes）细胞治疗中心（Centre de Thérapie Cellulaire）
摘要
由于半自动化CliniMACS Plus?设备的CS2版本在2024年停止生产，我们需要验证使用全自动CliniMACS Prodigy?（Miltenyi Biotec）进行CD34+免疫选择的过程。此次转换使我们能够评估Prodigy?在解冻后的血浆置换产品上的性能。我们将结果与之前使用CliniMACS Plus?处理的新鲜供体血浆置换产品进行了比较，并在此验证过程中也将结果与使用Prodigy?处理的新鲜产品进行了对比。来自rhG-CSF动员的供体的新鲜血浆置换产品使用这两种设备进行了处理。用于销毁的冷冻保存血浆置换产品被解冻（使用Viathaw?，Cytiva），然后在Sepax-II?上进行清洗，并在MACS GMP? PBS/MgCl?溶液中加入HSA和rh-DNase后，再使用Prodigy?进行CD34+选择。流式细胞术（Stem Kit? – Beckman Coulter）用于定量CD34+和CD45+细胞。从新鲜产品中获得的CD34+纯度（95% vs 97%）和存活率（95% vs 99%）在CliniMACS Plus?（n=10）和Prodigy?（n=10）之间相似。T细胞清除效果方面，CliniMACS Plus?略优（0.1 × 10? vs 0.4 × 10? CD3?/kg），而CD34+的回收率方面Prodigy?更高效（66% vs 53%）。使用Prodigy?处理解冻后的血浆置换产品，获得了98%的CD34+纯度、51%的回收率以及0.3 × 10? CD3?/kg的浓度，均符合我们中心的验收标准。全自动工作流程显著减少了人工操作时间（2小时 vs 5小时）和操作者的干预。Prodigy?平台能够从新鲜和解冻产品中重复进行CD34+免疫选择，提高了移植工程和自体造血细胞（ATMP）制造的标准化、效率和灵活性。此外，当有冷冻保存的产品可用时，这也扩展了临床应用的选择范围。
部分内容摘要
背景
CD34?细胞的免疫选择涉及从细胞产品中分离和富集造血干细胞（HSCs），主要使用与磁珠结合的单克隆抗体[1]。该技术于90年代被开发、评估并最终放弃，目的是为了清除收集的自体血液中的循环肿瘤细胞，并防止高剂量巩固化疗后自体HSCs移植后的复发，这导致了该设备的退市。细胞来源
新鲜血浆置换产品来自使用重组人G-CSF（rhG-CSF）动员的供体，随后经过处理以产生CD34?干细胞增强剂（SCBs），用于治疗移植功能不佳的情况（PGF）。血浆置换在CD34?免疫选择前一天进行，并在+4-10°C下保存过夜。研究中使用的冷冻保存的自体血浆置换产品因移植指征丧失（主要是由于供体死亡）而被计划销毁。使用CliniMACS Prodigy替代CliniMACS Plus后，CD34?细胞免疫选择的性能相当
由于半自动化CliniMACS Plus?设备的CS2版本停止生产，我们使用全自动CliniMACS Prodigy?验证了CD34+免疫选择的过程。使用CliniMACS Plus系统进行的最后十次免疫选择与使用CliniMACS Prodigy设备进行的十次选择进行了比较。CliniMACS Plus系统的T细胞清除效果略好（?5.0 [?5.4 - ?3.5]），而Prodigy系统的T细胞清除效果为?4.7 [范围：?4.9; ?4.1]。讨论
本研究证明了使用CliniMACS Prodigy平台对解冻后的血浆置换产品进行CD34?免疫磁选是可行的。处理缓冲液中的特定成分——富含1%人血清白蛋白（HSA）和重组人DNase（Pulmozyme，10 U/mL）——以及使用Sepax-2?去除DMSO和细胞碎片，对于保持解冻产品的流动性可能至关重要。实际上，在解冻后的样本中未观察到聚集现象。结论
使用CliniMACS Prodigy?设备进行的CD34?细胞免疫选择能够一致地分离出含有超过95% CD34?前体细胞的组分，且残留CD3?细胞浓度低于0.5 × 10?个/千克，CD34?的回收率在50%到66%之间，符合SFGM-TC指南的要求，无论是从新鲜还是解冻后的动员血浆置换产品中获取的细胞。该过程的近乎完全自动化将操作者的干预限制在免疫选择步骤之前的设置阶段。作者贡献
BC设计了研究方案。PL、LR和CM进行了实验。CD和CL负责质量控制，BC和ALC分析了所有结果。ALC生成了图表并撰写了手稿。所有作者都阅读、评论并最终批准了当前版本的手稿。伦理批准和参与同意
患者根据机构和EBMT的政策同意进行细胞采集和移植。所有参与患者均签署了知情同意书。
