针对突变型H-ras和C-raf.1基因的靶向基因治疗在大鼠中抑制肝细胞癌的效果存在差异：一种机制学分析方法

《Pharmaceutical Research》：Targeted Gene Therapy for Mutated H-ras and C-raf.1 Genes Exhibited Variable Efficacy in Inhibiting Hepatocellular Carcinoma in Rats: A Mechanistic Approach

肝癌中H-ras和c-raf.1基因靶向反义寡核苷酸（ASO）治疗研究显示，靶向H-ras的ASO在抑制肿瘤发生、诱导细胞凋亡及调节线粒体膜电位方面优于c-raf.1靶向ASO，并伴随p53蛋白表达上调及Hep Par I/HSP70蛋白表达下降。

　　

摘要

目的

突变的H-ras或c-raf.1基因表达通常与肝细胞癌（HCC）的发展和进展有关。通过在化学诱导的HCC大鼠中静脉注射相应的骨架修饰的反义寡核苷酸（ASO），我们试图了解这些治疗方法的有效性和作用机制。

方法

我们进行了ASO介导的体外细胞毒性实验、细胞凋亡研究、线粒体膜电位（MMP）的变化，以及这些物质在HCC大鼠体内的积累情况；同时检测了H-ras和c-raf.1基因及蛋白质的表达情况，进行了多种蛋白质的免疫组化评估，以及caspase 3/9的活性测定，并测量了肝细胞质中的丙氨酸氨基转移酶和微粒体中的天冬氨酸氨基转移酶水平。

结果

针对突变型H-ras和c-raf.1设计的纳米级且溶解度良好的ASO，在人类HCC细胞中的半数有效浓度（IC50）值存在差异，在正常人类肝细胞中未表现出显著的毒性。标记的ASO在正常大鼠肝脏中分布均匀。ASO处理显著增加了HepG2和Huh7细胞的凋亡程度，并降低了MMP的水平。ASO处理显著减少了肝脏局灶性病变的数量，并抑制了肿瘤的发生。ASO处理抑制了相应基因的表达，增加了p53蛋白的表达，并降低了HCC大鼠肝脏中Hep Par I和HSP70蛋白的表达。ASO处理在不同程度上改变了HCC大鼠中的caspase-3和caspase-9蛋白水平。在正常大鼠中，ASO给药后肝脏标志酶的水平没有变化；而在致癌物处理的大鼠中，这些酶的水平趋于恢复正常。

结论

针对突变型H-ras的ASO治疗比针对c-raf.1的ASO治疗具有更好的治疗效果。因此，阻断突变型H-ras可能比阻断c-raf.1对抑制HCC有更显著的影响。

图形摘要