《Scientific Reports》：Behavioral attenuation of marble burying and digging mirrors evoked and non-evoked phenotypes in the endometriosis mouse model
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为解决传统诱发行为测试无法全面捕捉子宫内膜异位症（ENDO）小鼠模型复杂行为表型的问题，本研究在经典诱发测试之外，整合了弹珠掩埋（MB）、挖掘等非诱发行为学测试。研究发现，ENDO小鼠的MB和挖掘能力显著降低，并与旷场、高架十字迷宫等测试所评估的探索行为减少、焦虑增加等表型相关，且与尾温甩尾、Von Frey机械痛阈等诱发痛觉过敏指标存在强关联。这为全面评估ENDO模型的行为-疼痛综合征提供了更精细的视角和新工具。
论文解读文章
在医学研究的广阔天地里，有一种疾病困扰着全球约10%的育龄女性——子宫内膜异位症（Endometriosis, ENDO）。通俗地讲，就是本应安分待在子宫内的内膜组织“离家出走”，在盆腔、卵巢甚至更远的地方“非法定居”并生长。这种“流亡组织”不仅会引起严重的慢性盆腔疼痛，还常常导致不孕，严重影响患者的生活质量。然而，科学家们对这种疾病的了解，尤其是其对患者行为和心理状态的深远影响，仍然像隔着一层毛玻璃。
传统的实验室研究，常常依赖于一些“刺激-反应”式的测试，比如用细丝轻触小鼠爪子（机械痛测试）或用热源照射小鼠尾巴（热痛测试），来评估动物是否对疼痛更敏感（即痛觉过敏）。这些测试虽然直接，却像只打开了观察房间的一盏灯，只能照亮“诱发痛”这一角落。那些因疾病本身而悄然改变的情绪、日常活动习惯、探索欲望等微妙而持续的行为变化——我们称之为“非诱发行为”——却常常隐匿在阴影之中。这些自发行为的变化，可能恰恰是理解患者所经历的、超越单纯疼痛的、更为全面的“痛苦”体验的关键。
正是为了点亮这另一半的房间，将行为评估的拼图拼凑完整，一篇发表于《Scientific Reports》的研究应运而生。研究团队的核心问题是：在经典的子宫内膜异位症小鼠模型身上，那些无需外界刺激、自发产生的日常行为（如埋弹珠、挖洞）会如何改变？这些改变又能告诉我们哪些关于疾病复杂性（包括焦虑、自发痛、运动动机等）的新信息？更重要的是，这些自发行为的改变，与我们已经熟知的、通过刺激诱发的疼痛指标之间，存在着怎样的关联？解答这些问题，将帮助我们更真实、更全面地模拟患者的体验，为开发更有效的治疗方案提供更精准的评估工具。
为了开展这项研究，研究人员主要应用了以下几项关键技术方法：他们首先构建了同系（syngeneic）子宫内膜异位症小鼠模型，利用C57BL/6J品系小鼠，将供体子宫片段注射到经过雌激素（estrogen）预处理的受体小鼠腹腔内。通过组织病理学染色（苏木精-伊红染色，即H&E染色）确认病灶形成，并检测腹腔液中的巨噬细胞亚型（M2型）和循环雌激素水平来验证模型。在行为学层面，研究整合了非诱发行为测试（如弹珠掩埋、挖掘、旷场测试、高架十字迷宫、过夜打洞测试、理毛行为记录）和经典的诱发痛觉测试（Von Frey细丝测机械痛阈、甩尾试验测热痛阈），以全面评估模型的行为与疼痛表型。
研究结果揭示了一系列深刻的行为改变：
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弹珠掩埋与挖掘能力显著减弱：与健康对照组小鼠相比，患有子宫内膜异位症（ENDO）的小鼠表现出明显的弹珠掩埋行为减少和自发挖掘能力下降，统计显著性极高（p值<0.0001）。这表明它们的筑巢/掩藏本能和重复性刻板行为模式受到了抑制。
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非诱发行为谱的全面改变：这种掩埋和挖掘能力的下降并非孤立现象。它与其他非诱发行为测试的结果形成了有意义的关联。ENDO小鼠在旷场测试中表现出主动打洞、理毛和探索行为的减少。更引人注目的是，它们在高架十字迷宫测试中显示出更高的焦虑样行为。数据分析表明，弹珠掩埋减少与焦虑增加的相关性最强（相关系数r=0.65），而挖掘减少则与过夜打洞测试的得分降低相关性最高（r=0.62）。有趣的是，掩埋和挖掘行为的减少，均与观察到的腹部收缩次数（一种可能反映自发内脏不适的行为指标）呈负相关（r值分别为-0.44和-0.46）。这意味着掩埋/挖掘越少的小鼠，表现出腹部不适行为的次数反而越多。
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明确的痛觉过敏表型：在经典的诱发测试中，ENDO小鼠确凿无疑地表现出了对机械刺激（Von Frey测试）和热刺激（甩尾试验）的痛觉过敏，验证了模型具有核心的疼痛特征。
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非诱发与诱发行为之间的桥梁：本研究最关键的发现之一，是建立了非诱发行为与诱发疼痛指标之间的定量联系。弹珠掩埋行为的减少，与热痛觉过敏（甩尾试验潜伏期缩短）呈最强的正相关（r=0.66）。而挖掘行为的减少，则与机械痛觉过敏（Von Frey阈值降低）呈极强的正相关（r=0.80）。这强有力的数据表明，小鼠自发的、日常活动的减退（如不爱埋东西、不爱挖洞），与实验室中测得的、对特定刺激的过度疼痛反应，共享着某种共同的病理生理基础，共同描绘出疾病更完整的行为-疼痛谱。
结论与讨论指出，弹珠掩埋、挖掘以及理毛模式等非诱发行为测试，是评估子宫内膜异位症小鼠模型的有效且新颖的工具。这些测试捕捉到了疾病状态下小鼠自发行为模式的微妙改变，这些改变可能对应着患者所经历的动机下降、兴趣减退（快感缺乏）和焦虑情绪。当将这些非诱发测试与传统的诱发疼痛测试相结合时，研究者能够获得一幅关于子宫内膜异位症行为学影响的、前所未有的细致全景图。这不仅仅是将几种测试简单叠加，而是构建了一个多维度的评估框架。该研究表明，评估疾病的影响，不能只盯着“喊痛”的阈值，更要观察“生活的热情”是否消退。这种综合评估策略对于未来开发旨在改善子宫内膜异位症患者整体生活状态（而不仅仅是减轻诱发痛）的新型疗法至关重要。它推动着临床前研究向更贴近患者真实体验、更人性化的方向迈进了一大步。
