抗寄生虫药物耐药性是一个全球性问题，困扰着世界各地的畜牧业者。尽管建议采用综合寄生虫管理措施并减少抗寄生虫药物的使用，以减缓耐药性的发展，但仍需要其他控制方法。使用疫苗作为生物控制手段正逐渐受到重视，Babavax?疫苗已在世界各地用于控制Haemonchus contortus。多项研究成功利用重组蛋白作为疫苗来控制寄生虫感染。选择合适的抗原和制备合适的疫苗配方对于疫苗的成功至关重要。
RNA干扰（RNAi）是一种保守的生物学机制，最初在秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）中得到研究，大约25年前被发现[7]。这种机制通过使用来自目标基因序列的双链RNA（dsRNA）诱导相应信使RNA（mRNA）的序列特异性降解，从而实现基因沉默。在最近的一项研究中[8]，RNAi被用来识别在Haemonchus contortus中具有潜在疫苗应用价值的候选基因。利用基于C. elegans的RNAi文库，筛选出能够引起急性RNAi表型的基因——尤其是那些影响幼虫发育的基因，共发现了56个H. contortus目标基因，其中41个基因表现出中等到强烈的表型效应。其中12个基因被选中进行重组表达和纯化，并评估了它们的免疫原性。本研究提供了这7个候选疫苗抗原的数据。
下面简要介绍了每个目标基因的背景信息，其生物学相关性在表1中列出。
脂肪酸合成酶（FAS）是一种复杂的多功能酶，由两个相同的多功能多肽组成。fasn-1有两种类型，每种类型包含三个N端和四个C端结构域。线虫的FAS属于II型酶，能够催化从辅酶A合成棕榈酸，在C. elegans、T. colubriformis和B. ovis中对其生存至关重要[9]。虽然FAS对线虫的生存至关重要，但对哺乳动物来说并非必需，因此它可能是一个很好的线虫特异性靶点。由于其较大的分子量（在C. elegans中约为286千道尔顿（kDa），只能单独表达其各个结构域。在这7个结构域中，KS、KR和TE结构域特别有研究价值，因为它们之前已被用于癌症和肥胖症的药物治疗研究[10, 11, 12, 13]。
氨基酰-tRNA合成酶是必需的酶，负责将氨基酸连接到相应的tRNA上，确保遗传信息的准确翻译[14]。除了这一功能外，真核生物的tRNA合成酶还参与非翻译过程，如免疫调节、血管生成、细胞凋亡和转录调控，这表明它们具有作为抗菌靶点的潜力[15]。在本研究中，针对ers-2（谷氨酰-tRNA合成酶）和drs-1（天冬氨酰-tRNA合成酶）的RNAi处理显著减少了幼虫的发育，使其仅发育到L3阶段（表1）。
H. contortus的NAD (P) H依赖性氧化还原酶（F36A2.3）属于NAD(P)H依赖性氧化还原酶家族[16]。与C. elegans中的同源蛋白类似，该基因对H. contortus的生存至关重要，因为用dsRNA处理后只有28.5%的线虫能发育到L3阶段[8]。
血清和糖皮质激素诱导激酶（sgk-1）已被证明可以调控C. elegans的发育、应激反应和寿命[17]。在H. contortus中，RNAi处理后有64%的线虫能够发育到L3阶段。
液泡ATP酶（vha-12）是驱动质子跨细胞膜转运的ATP泵[18]。据报道，液泡ATP酶的催化部分由A和B两个亚基组成，线虫中的相应亚基分别为vha-12和vha-13。
转录共激活因子（
cbp-1）在
Haemonchus contortus中与哺乳动物的CBP和p300转录共激活因子同源，具有组蛋白乙酰转移酶（HAT）活性。这种活性对
C. elegans中的蛋白质功能至关重要[19]。针对
H. contortus cbp-1的RNAi处理导致只有53%的线虫能发育到L3阶段，而
C. elegans中的RNAi处理则导致胚胎死亡。由于
cbp-1的分子量较大（约227千道尔顿），在
E. coli中完全表达并不实际，但如
C. elegans所示，表达其活性结构域是可行的[19]。
其中一些目标基因以分泌产物（ESP）的形式存在，在寄生虫与宿主的相互作用中发挥复杂作用[20, 21, 22]。这些分泌产物含有多种蛋白质，可以抑制或刺激宿主的免疫反应，从而显著影响寄生虫的致病性。与宿主细胞的结合对于ESP的功能至关重要，通常涉及受体-配体相互作用（例如半乳糖苷结合蛋白与β-半乳糖苷的结合）。线虫的ESP通过多种机制调节宿主免疫：干扰抗原处理和抑制巨噬细胞及抗原呈递细胞（APC）的功能是最重要的因素[21]。
在这项研究中，通过RNAi筛选确定了7个Haemonchus contortus基因目标，对其进行了克隆、表达和纯化，并专门针对脂肪酸合成酶（FAS）进行了酶活性和宿主识别测试。
