《European Journal of Pharmacology》：Oridonin Regulates Pituitary-derived Folliculostellate Cells Apoptosis via the p38 MAPK/p53 Signaling Pathway
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非功能性垂体腺瘤（NFPA）缺乏特效药物治疗，本研究揭示oridonin（ORI）通过激活p38 MAPK/p53通路诱导PDFS细胞凋亡，抑制迁移侵袭。体外实验显示ORI对PDFS细胞半数抑制浓度（54.9 μM）显著低于其他瘤细胞系。分子对接证实ORI与p38蛋白高亲和力结合（-7.3 kcal/mol），促进p38磷酸化及p53表达。阻断该通路（SB202190）逆转ORI的促凋亡及抑癌效应。体内实验表明ORI（5-10 mg/kg）有效抑制裸鼠皮下瘤生长，上调Bax和cleaved caspase-3，下调Bcl-2，且无显著毒性。ORI为NFPA治疗提供新靶点。
Xingyi Yuan|Shixue Luo|Dong Fan|Zhongyu Wang|Huitong Chen|Xuanhao Huang|Weiwen Wang|Weiyu Hu|Jing Liu|Zongming Wang|Xin Wang
广东药科大学第一附属医院神经外科，广州，510080，中国
摘要
由于缺乏有效的药物治疗方法，非功能性垂体腺瘤的治疗仍然具有挑战性。先前的一项研究表明，奥里多宁（ORI）能够诱导垂体来源的卵泡星状细胞（PDFS）发生凋亡；因此，本研究进一步探讨了ORI调节PDFS细胞凋亡的分子机制。为了验证p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/p53信号通路的调节作用，使用了分子对接技术和p38 MAPK抑制剂SB202190来评估该通路的改变。通过Calcein-AM/碘化丙啶（PI）双染色、Transwell迁移和侵袭实验以及Western blot分析，评估了ORI对细胞存活率、迁移能力、侵袭性和凋亡的影响。为了进一步评估ORI的体内效果，在裸鼠中建立了皮下异种移植模型，并以5毫克和10毫克/公斤的剂量给予ORI，以评估其治疗疗效和安全性。通过苏木精-伊红（H&E）染色分析主要器官的组织病理变化来评估安全性。对肿瘤组织进行Western blot分析，以评估p38 MAPK/p53通路的激活情况以及凋亡相关蛋白的表达情况。分子对接和Western blot实验证实，ORI与p38蛋白的结合亲和力为?7.3 kcal/mol，显著增加了p38的磷酸化和p53的表达。p38 MAPK抑制剂SB202190逆转了ORI引起的细胞死亡、迁移和侵袭以及凋亡效应，突显了p38 MAPK/p53通路的关键作用。ORI在裸鼠中有效抑制了皮下肿瘤的生长，且没有明显的毒性，同时通过激活p38 MAPK/p53通路上调了凋亡相关蛋白Bax和切割型caspase-3的表达，并下调了Bcl-2的表达。
引言
非功能性垂体腺瘤（NFPAs）是最常见的垂体腺瘤类型，约占所有垂体腺瘤的14–54%（Ntali和Wass 2018）。与功能性垂体腺瘤不同，NFPAs通常不分泌激素，因此在临床上不会表现出与激素相关的症状；相反，患者常因肿瘤生长而出现局部压迫症状，如头痛、视力障碍和垂体功能减退（Chen等人2011）。由于缺乏有效的内分泌生物标志物用于诊断，NFPAs的治疗主要依赖于手术切除，特别是对于有压迫症状的患者（Lucas等人2016）。对于肿瘤未完全切除或术后复发的患者，建议进行辅助放疗；然而，这可能导致某些患者出现术后垂体功能减退（Gittoes等人1998）。目前尚无被证实对NFPAs有效的一线药物治疗方法。因此，开发有效的NFPAs治疗药物已成为迫切的临床需求。
许多天然产物已被报道具有抗肿瘤活性，其精确的分子机制正在积极研究中。中药红花（Isodon rubescens (Hemsl.)）已被证明具有显著的抗炎特性（Wang等人2023）。其活性成分之一奥里多宁（ORI）是一种属于epi-sclareol二萜类的二萜化合物，从红花中提取，被认为是其主要生物活性成分之一（Yang等人2017）。ORI已被报道具有多种药理作用，包括抗菌、抗炎、抗氧化和增强免疫的作用。除了这些作用外，ORI还表现出广谱的抗肿瘤活性（Li等人2016）。其抗肿瘤机制涉及多靶点调节，包括诱导肿瘤细胞凋亡、阻断细胞周期进展（例如G2/M期停滞）（Ali等人2024）以及抑制增殖相关信号通路（例如PI3K/AKT、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和NF-κB通路）（Chauhan等人2025）。ORI还通过p38 MAPK信号通路诱导多种肿瘤细胞的凋亡。p38 MAPK通路在细胞应激反应和凋亡调节中起着关键作用。研究表明，ORI治疗可激活p38 MAPK，进而调节下游凋亡蛋白的表达，包括Bcl-2家族成员和caspases，从而促进凋亡（Zhang等人2024）。这些发现表明，ORI的抗癌作用至少部分是通过激活p38 MAPK通路实现的，这突显了其作为癌症治疗候选物的潜力。
MAPK属于Ser/Thr激酶家族，在调节复杂的细胞程序（如增殖、分化、发育、转化、炎症反应和凋亡）中起着关键作用，它通过传递、放大和整合来自各种刺激的信号并触发适当的生理反应（Song等人2025）。MAPK信号通路主要包括三个主要级联：细胞外信号调节蛋白激酶、c-Jun N末端激酶和p38 MAPK。研究表明，ORI可以激活p38 MAPK通路，诱导肿瘤细胞凋亡，通过调节自噬和导致细胞周期停滞来抑制肿瘤生长（Li等人2024）。这一机制已在多种肿瘤细胞类型中得到验证；例如，在胃癌细胞中，ORI通过激活p38 MAPK通路诱导凋亡并抑制细胞迁移和侵袭（Phan等人2023）。此外，ORI还被证明可以抑制胰腺癌细胞系BxPC-3的增殖，增强吉西他滨诱导的凋亡，并激活p38和p53。体内实验进一步表明，ORI与吉西他滨联合使用可显著抑制肿瘤生长并促进p38和p53的激活（Bu等人2012）。
近年来，我们的研究小组一直在研究中药对NFPAs的作用。我们已经证明ORI对来自这些腺瘤的垂体来源的卵泡星状细胞（PDFS）具有抗肿瘤活性（Chen等人2024）。对凋亡机制的初步分析显示，p38 MAPK/p53通路发生了显著变化。基于这些发现，我们旨在进一步阐明ORI如何通过调节p38 MAPK/p53通路来调控PDFS细胞的凋亡。
试剂
ORI由MedChemExpress（MCE，美国）提供，纯度为99.85%。ORI粉末溶解在二甲基亚砜（DMSO）中，并储存在-20°C。在所有细胞培养实验中，最终的DMSO浓度保持在0.01%以下，对细胞生长或死亡没有可检测到的影响。Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒（BS350B）购自BioSharp。SB202190（HY-10295；MCE）也溶解在DMSO中。使用的初级抗体如下：Bcl-2（1:1000；T40056）；
ORI诱导PDFS细胞凋亡
CCK-8检测显示，ORI对PDFS、GH3和MMQ细胞的24小时半最大抑制浓度分别为54.9、3.387和11.36 μM（图2A-C）。鉴于已有针对分泌激素的垂体肿瘤（如GH3和MMQ细胞）的治疗药物，我们进一步研究了PDFS细胞，因为目前尚无针对NFPAs的特异性药物。
为了研究ORI在PDFS细胞中的作用机制，我们使用了三种通路抑制剂
讨论
基于我们之前的体外研究，证明了ORI在PDFS细胞中诱导凋亡，我们试图阐明ORI在PDFS细胞中诱导凋亡的潜在分子机制，并评估其体内的抗肿瘤效果。本研究表明，ORI主要通过激活p38 MAPK/p53信号通路在PDFS细胞中发挥抗肿瘤作用。分子对接分析显示，ORI与p38具有很强的结合亲和力，与关键蛋白相互作用
结论
总之，我们证明了ORI通过激活p38 MAPK/p53信号通路，在抑制PDFS细胞的生长、迁移和侵袭方面起着关键作用。此外，它在体外和体内均能有效诱导肿瘤细胞凋亡。ORI是一种新型的NFPAs治疗剂。对其抗肿瘤效果的进一步研究将有助于其在癌症治疗中的应用。
作者贡献声明
Jing Liu：撰写——审稿与编辑，项目管理。Weiyu Hu：可视化，监督。Xin Wang：撰写——审稿与编辑，可视化，监督，资金获取。Zongming Wang：撰写——审稿与编辑，可视化，监督，项目管理。Weiwen Wang：撰写——初稿。Xuanhao Huang：撰写——初稿。Huitong Chen：概念构思。Shixue Luo：概念构思。Xingyi Yuan：概念构思。Zhongyu Wang：数据管理。Dong Fan：数据可用性声明
作者确认支持研究结果的数据可在文章中找到。
伦理声明
所有实验方案均符合美国国立卫生研究院发布的《实验室动物护理和使用指南》，并获得了广东药大学的批准（批准编号SCXK(GD)2022-0002）。此外，在整个研究过程中以及对动物实施安乐死的过程中，所有动物都得到了人道对待。
致谢
本研究得到了国家自然科学基金青年学者项目（项目编号81802678）、广东省中医药管理局项目（项目编号20231210）、广州市关键临床技术项目（项目编号2023P-ZD18）以及广东省医学会临床研究专项基金（项目编号2024HY-A6003）的支持。
